tag:blogger.com,1999:blog-28691297040364339172024-03-13T18:19:08.188+01:00 Javi Dark BlogAnonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.comBlogger100125tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-38400779947410527822019-01-25T00:00:00.000+01:002019-01-25T00:00:05.580+01:00Poesía para el cumple de Aura<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Has llegado a la ciudad </i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>donde cada cual se pierde.</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Pon tu rumbo al frente</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>y escapa de la vanidad.</i></span></div>
<div style="text-align: center;">
<b id="docs-internal-guid-ec4f879a-7fff-dba8-9134-777b3473eb07" style="font-weight: normal;"><i><span data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-color: #f2eee5; color: #eeeeee;"><br /></span></i></b></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Hallarás temor, quizá vacío.</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>También amor, dolor, y frío.</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Junto a lujos que distraen,</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>y horas de ocio si el sol cae.</i></span></div>
<div style="text-align: center;">
<b style="font-weight: normal;"><i><span data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-color: #f2eee5; color: #eeeeee;"><br /></span></i></b></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Narra historias sin temer,</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>son instantes de placer.</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Añade pasión y empeño,</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>y lograrás cada sueño.</i></span></div>
<div style="text-align: center;">
<b style="font-weight: normal;"><i><span data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-color: #f2eee5; color: #eeeeee;"><br /></span></i></b></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Compártenos recuerdos,</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>di de vernos.</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Seamos partícipes de afecto,</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>en lugares perimperfectos.</i></span></div>
<div style="text-align: center;">
<b style="font-weight: normal;"><i><span data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-color: #f2eee5; color: #eeeeee;"><br /></span></i></b></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Allá donde el buen tiempo,</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Esté en parques con sentimiento,</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>haz que se crucen tu vida y la mía </i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>plan contigo como dulce lotería. </i></span></div>
<div style="text-align: center;">
<b style="font-weight: normal;"><i><span data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-color: #f2eee5; color: #eeeeee;"><br /></span></i></b></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Ha prosa, y en cada sueño y en el amor,</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>entrega sonrisa y devoción.</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Pues tienes la llama en tu interior,</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>que hará escribir con ilusión.</i></span></div>
<div style="text-align: center;">
<b style="font-weight: normal;"><i><span data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-color: #f2eee5; color: #eeeeee;"><br /></span></i></b></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Encontrarás a tu alrededor</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>de mil problemas solución,</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Pues tiemble el suelo y llegue al mar,</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Te ayudaría sin dudar.</i></span></div>
<div style="text-align: center;">
<b style="font-weight: normal;"><i><span data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-color: #f2eee5; color: #eeeeee;"><br /></span></i></b></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Y si es tu llama la que se apaga,</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>halla mi hombro como almohada.</i></span></div>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>Pues "no hay tormenta ni bonanza</i></span></div>
<span data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-color: #f2eee5; color: #eeeeee;"><br /></span>
<div dir="ltr" style="line-height: 1.38; margin-bottom: 0pt; margin-top: 0pt; text-align: center;">
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #f2eee5; background-color: transparent; color: #eeeeee; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><i>que tu rumbo a torcer alcanza".</i></span></div>
<div>
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #000000; background-color: transparent; color: black; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-style: normal; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><br /></span></div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="https://1.bp.blogspot.com/-BRAuqMx3tUU/XEoQEYq6-6I/AAAAAAAAD9I/aavrTYXcqPwWpamniXHaXLKnzuWrWA5mACLcBGAs/s1600/7ed-29-pacifism.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" data-original-height="458" data-original-width="568" height="258" src="https://1.bp.blogspot.com/-BRAuqMx3tUU/XEoQEYq6-6I/AAAAAAAAD9I/aavrTYXcqPwWpamniXHaXLKnzuWrWA5mACLcBGAs/s320/7ed-29-pacifism.png" width="320" /></a></div>
<div>
<span data-darkreader-inline-bgcolor="" data-darkreader-inline-color="" style="--darkreader-inline-bgcolor: transparent; --darkreader-inline-color: #000000; background-color: transparent; color: black; font-family: "arial"; font-size: 14pt; font-style: normal; font-variant: normal; font-weight: 400; text-decoration: none; vertical-align: baseline; white-space: pre-wrap;"><br /></span></div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-40326755264503130662019-01-21T09:52:00.001+01:002019-01-21T09:55:57.363+01:00Apply conditional formatting in Google Sheets after pasting<p dir="ltr">In Google Sheets, you encounter a problem when pasting data into a conditional formatting cell: it's style is lost.</p>
<p dir="ltr">To solve it, just design your conditional formatting attached to another cell (EG. For cells A1:F10 apply red background when =$B1<0), and create a filter. Sort by that column (B) and the conditional formatting for all the range is refreshed properly.</p>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-82011764793059261412018-08-05T17:12:00.003+02:002018-08-05T17:12:34.311+02:00AWS Lex web browser checksum error [SOLVED]<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="https://2.bp.blogspot.com/-sez1j2dvnkQ/W2cTP2Kw4ZI/AAAAAAAAAWM/xkgTGEmdDuU9aVTclOL0PyeLF6jh8xBrwCLcBGAs/s1600/chatbot-diagram_DevPost.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" data-original-height="486" data-original-width="493" height="315" src="https://2.bp.blogspot.com/-sez1j2dvnkQ/W2cTP2Kw4ZI/AAAAAAAAAWM/xkgTGEmdDuU9aVTclOL0PyeLF6jh8xBrwCLcBGAs/s320/chatbot-diagram_DevPost.png" width="320" /></a></div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
</div>
<br />
<br />
If you are getting the following error: <i>the checksum value doesn't match for the resource named {theNameOfYourIntent}</i> in AWS Lex web browser console, on building after feeding intents, try the following:<br />
<br />
1 (kind of optional) - Make a backup of your intent information in a TXT file (in case you lose your progress, which didn't happened to me twice)<br />
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="https://1.bp.blogspot.com/-v8swii0u95o/W2cPS95It0I/AAAAAAAAAV4/EMCvU9skZPU4kdUViMT71aVLz6geOabkwCLcBGAs/s1600/Captura.PNG" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" data-original-height="756" data-original-width="498" height="320" src="https://1.bp.blogspot.com/-v8swii0u95o/W2cPS95It0I/AAAAAAAAAV4/EMCvU9skZPU4kdUViMT71aVLz6geOabkwCLcBGAs/s320/Captura.PNG" width="210" /></a></div>
<br />
<br />
2 Delete the intent<br />
<br />
3 Create a new intent<br />
<br />
4 Search existing intents<br />
<br />
5 Load from a list the exact name you had<br />
<br />
6 Build again<br />
<br />
7 repeat in every case it happens with another intents<br />
<br />
It solved my problem.<br />
<div>
<br /></div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-62269594565795182722017-09-10T02:20:00.001+02:002017-09-10T02:20:47.536+02:00Adaptarme más o morir<p dir="ltr">Deseo. Indecisión. Barrera mental.</p>
<p dir="ltr">Piloto automático. Cesión de responsabilidad. Culpa.</p>
<p dir="ltr">Mal.</p>
<p dir="ltr">Las circunstancias nunca deben estar de mi parte. Así es como se aprende de verdad a luchar.</p>
<p dir="ltr">Si algo se pierde puede ser porque no lo he hecho tan bien como debería. He de eliminar esa posibilidad.</p>
<p dir="ltr">Lo estúpido es quedarse de brazos cruzados en respuesta. O elimino <u>las</u> excusas, o la vida se me acabará yendo.</p>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-74210281233337294262017-01-03T11:43:00.000+01:002017-01-03T11:52:30.991+01:00Add pre-builded functionalities in Eclipse for Java<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="https://4.bp.blogspot.com/-RpV95NmewSE/WGt_rTdQBKI/AAAAAAAACOg/kqgUmalu_LkKO6ut3QTdmFoLb1TFO0JlgCLcB/s1600/Java%2BEclipse.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><span style="color: black;"><img border="0" height="360" src="https://4.bp.blogspot.com/-RpV95NmewSE/WGt_rTdQBKI/AAAAAAAACOg/kqgUmalu_LkKO6ut3QTdmFoLb1TFO0JlgCLcB/s400/Java%2BEclipse.png" width="400" /></span></a></div>
This is a key process in Java IMHO that I didn't manage to find entirely on the Internet until I realised how to do it. You may jump to the number you are struggled with.
Import Java classes from Apache, etc<br />
<br />
1.- Identify our programming needs to solve. E.G.: replace accents on the go.<br />
<br />
<br />
2.- Search what we need to do with Java on a browser. This gives us keywords for "3.-". E.G. search replace string accents library java apache<br />
<br />
<div style="text-align: center;">
<a href="https://2.bp.blogspot.com/-V14BloUYygk/WGt5bfVBzII/AAAAAAAACOA/LOCaqRyqpTYy1yfIqw0O4DI6kSAPqYcTgCLcB/s1600/Capture.PNG" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><span style="color: black; font-family: "arial" , "helvetica" , sans-serif;"><img border="0" height="316" src="https://2.bp.blogspot.com/-V14BloUYygk/WGt5bfVBzII/AAAAAAAACOA/LOCaqRyqpTYy1yfIqw0O4DI6kSAPqYcTgCLcB/s320/Capture.PNG" width="320" /></span></a>
</div>
<span style="font-family: "arial" , "helvetica" , sans-serif;"><br /></span>
If it's not in the default java libraries that we may be importing automatically in our .java code:<br />
3.- Import that solution (download a .jar containing it), because you always must have its library.<br />
<br />
<div style="text-align: center;">
<a href="https://2.bp.blogspot.com/-wZyvHlGTotw/WGt57Mf5XDI/AAAAAAAACOI/oy7Zjm4kibsiI6BYDqjIr5TRwXzMAnRcACLcB/s1600/Capture2.PNG" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><span style="color: black; font-family: "arial" , "helvetica" , sans-serif;"><img border="0" height="256" src="https://2.bp.blogspot.com/-wZyvHlGTotw/WGt57Mf5XDI/AAAAAAAACOI/oy7Zjm4kibsiI6BYDqjIr5TRwXzMAnRcACLcB/s320/Capture2.PNG" width="320" /></span></a>
</div>
<span style="font-family: "arial" , "helvetica" , sans-serif;"><br /></span>
4.- Add it to your project reference libraries:<br />
<div style="text-align: center;">
<a href="https://1.bp.blogspot.com/-RpsGXBQQpzQ/WGt66xpecCI/AAAAAAAACOU/ZPV2Aay3-MAAcjFlzVq2dyb45Nku0sv7gCLcB/s1600/Capture3.PNG" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" height="150" src="https://1.bp.blogspot.com/-RpsGXBQQpzQ/WGt66xpecCI/AAAAAAAACOU/ZPV2Aay3-MAAcjFlzVq2dyb45Nku0sv7gCLcB/s320/Capture3.PNG" width="320" /></a>
</div>
- Select something in the Eclipse package explorer. E.G. for Windows: Ctrl+A (select all), F5 (refresh).<br />
- Right click the new jar file, and select Build Path -> Add to Build Path.<br />
<br />
<br />
5.- Import the library as usual. E.G.: add import org.apache.commons.lang3.StringUtils; to your .java.<br />
<br />
<br />
6.- Adapt your new functionalit(y/ies).<br />
<br />
<br />
Hope it helps not only me :)Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-41067216250451227652016-08-18T10:38:00.001+02:002016-08-29T16:25:13.190+02:00Sentimiento en la bonita distancia<div dir="ltr">
<div style="text-align: center;">
Presencia, una parte de mi alma con su esencia.</div>
<div style="text-align: center;">
Tenencia de benditos pensamientos en su ausencia.</div>
<div style="text-align: center;">
Vuelve el ansia, como al escuchar legendarios riffs. Impaciencia.</div>
</div>
<div dir="ltr">
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
</div>
<div dir="ltr">
<div style="text-align: center;">
Noto volver la espera en la distancia.</div>
<div style="text-align: center;">
Recuerdo velas de vainillina, sólo su fragancia.</div>
<div style="text-align: center;">
Evócala en cada perfumería de Francia.</div>
</div>
<div dir="ltr">
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
</div>
<div dir="ltr">
<div style="text-align: center;">
Aumento. Un incremento del sentimiento.</div>
<div style="text-align: center;">
¿Palpita algo bajo el cemento? Algo siento.</div>
<div style="text-align: center;">
Espero que este bonito intento, patrocinado por maldita seductora,</div>
</div>
<div dir="ltr">
<div style="text-align: center;">
traiga muchos más de estos momentos.</div>
</div>
<div dir="ltr">
<br /></div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="https://lh3.googleusercontent.com/-1z7s-QFU9qA/V7V0DJsDMqI/AAAAAAAACLA/EKFZB5VZ3Wc/s1600/IMG_20160816_221047.jpg" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"> <img border="0" src="https://lh3.googleusercontent.com/-1z7s-QFU9qA/V7V0DJsDMqI/AAAAAAAACLA/EKFZB5VZ3Wc/s640/IMG_20160816_221047.jpg" /> </a> </div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-58321668402111023922016-03-14T22:51:00.000+01:002016-03-14T22:51:19.430+01:00Leyendas del rock 2016<div style="text-align: center;">
He adaptado el cartel del leyendas para incluir algunos grupazos que no estaban recogidos.</div>
<br />
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="https://3.bp.blogspot.com/-zZzDRmlV9VE/Vucx-Pn9FuI/AAAAAAAACFc/B-0JSlmcFRII4Jyp7ekG1COYoR8lBfWJw/s1600/Leyendas%2B2016.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" height="640" src="https://3.bp.blogspot.com/-zZzDRmlV9VE/Vucx-Pn9FuI/AAAAAAAACFc/B-0JSlmcFRII4Jyp7ekG1COYoR8lBfWJw/s640/Leyendas%2B2016.png" width="495" /></a></div>
<br />
<br />
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
</div>
<div style="text-align: center;">
</div>
<div style="text-align: center;">
<a href="http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/es/" rel="license"><img alt="Licencia de Creative Commons" src="https://i.creativecommons.org/l/by-nc/3.0/es/88x31.png" style="border-width: 0;" /></a></div>
<div style="text-align: center;">
Este edición está bajo una</div>
<div style="text-align: center;">
<a href="http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/es/" rel="license">licencia de Creative Commons</a></div>
<div style="text-align: center;">
Reconocimiento-NoComercial</div>
<div style="text-align: center;">
3.0 España.</div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com1tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-24764996711870915792015-10-19T01:00:00.000+02:002016-08-29T16:29:24.035+02:00<div style="text-align: center;">
En una duna</div>
<div style="text-align: center;">
Bajo la luna</div>
<div style="text-align: center;">
En mí se acuna</div>
<div style="text-align: center;">
Algo que abruma</div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<div style="text-align: center;">
Pero es ternura</div>
<div style="text-align: center;">
La sepultura</div>
<div style="text-align: center;">
Ya no perdura</div>
<div style="text-align: center;">
Sólo es locura</div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-53988028126513535632015-08-21T12:40:00.002+02:002015-08-21T12:44:07.288+02:00Eliminar campana de notificaciones de Google Chrome en la Barra de tareas de Windows 10.<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="http://3.bp.blogspot.com/-fbyz_RdqHwg/VdcAG12iwbI/AAAAAAAABfI/I-e8SbPvKCQ/s1600/unnamed.jpg" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" height="213" src="http://3.bp.blogspot.com/-fbyz_RdqHwg/VdcAG12iwbI/AAAAAAAABfI/I-e8SbPvKCQ/s320/unnamed.jpg" width="320" /></a></div>
<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><br /></span>
<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;"><br /></span><br />
<div style="text-align: center;">
<span style="font-family: Arial, Helvetica, sans-serif;">Click izquierdo → (se abre) → Click derecho → Propiedades: Cliclk izquierdo → Inhabilitar notificaciones de Google Chrome.</span></div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-3871447547629339992015-06-17T14:32:00.001+02:002015-08-21T12:43:51.433+02:00Poesía-recomendación para Estorgik<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Felizmente, fichas fulanos,</div>
<div style="text-align: center;">
fundas fetiches flácidos,</div>
<div style="text-align: center;">
follas formando flechas,</div>
<div style="text-align: center;">
flechazos de firmes falos.</div>
<br />
<div dir="ltr" style="text-align: center;">
<br /></div>
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Felino, fisuras fosos fornidos,</div>
<div style="text-align: center;">
ferozmente fuiste fallado.</div>
<div style="text-align: center;">
A fulanos que follan y fallan,</div>
<div style="text-align: center;">
fumiga fermentos fálicos.</div>
<br />
<div dir="ltr">
<br /></div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="http://lh3.googleusercontent.com/-1-7yk5mGf3k/VYFoy3YfvFI/AAAAAAAABH0/cjAh-J0gyck/s1600/Screenshot_2015-06-17-09-36-26.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"> <img border="0" src="http://lh3.googleusercontent.com/-1-7yk5mGf3k/VYFoy3YfvFI/AAAAAAAABH0/cjAh-J0gyck/s640/Screenshot_2015-06-17-09-36-26.png" /> </a> </div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-36215636791063801472015-06-01T03:29:00.001+02:002015-08-21T12:43:12.177+02:00Tres horas <div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Tres horas, un momento</div>
<div style="text-align: center;">
si no estás muy atento,</div>
<div style="text-align: center;">
o el tiempo perfecto</div>
<div style="text-align: center;">
de fluir como viento.</div>
<br />
<div dir="ltr" style="text-align: center;">
<br /></div>
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
De aprender, de reír,</div>
<div style="text-align: center;">
de muy bien invertir,</div>
<div style="text-align: center;">
para que con escribir,</div>
<div style="text-align: center;">
impulsen tu porvenir.</div>
<br />
<div dir="ltr" style="text-align: center;">
<br /></div>
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Son pues horas de silencio,</div>
<div style="text-align: center;">
tregua de tranquilidad, </div>
<div style="text-align: center;">
pero si no tomas en serio, </div>
<div style="text-align: center;">
de un revés te hacen ir mal.</div>
<br />
<div dir="ltr" style="text-align: center;">
<br /></div>
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Tres horas, un momento</div>
<div style="text-align: center;">
si no estás muy atento,</div>
<div style="text-align: center;">
o el tiempo perfecto</div>
<div style="text-align: center;">
de fluir como viento.</div>
<br />
<div dir="ltr" style="text-align: center;">
<br /></div>
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Hay también horas bonitas </div>
<div style="text-align: center;">
compartiendo intimidad:</div>
<div style="text-align: center;">
si su cuerpo bien excitas,</div>
<div style="text-align: center;">
de emoción podréis temblar.</div>
<br />
<div dir="ltr" style="text-align: center;">
<br /></div>
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
En tres horas te da tiempo </div>
<div style="text-align: center;">
a quedarte sin aliento:</div>
<div style="text-align: center;">
amar, vivir, sentir, </div>
<div style="text-align: center;">
hasta llegar a ser feliz.</div>
<br />
<div dir="ltr">
<br /></div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="http://lh3.googleusercontent.com/-YSdtH5zn-PA/VYGFBlKfWfI/AAAAAAAABIE/qSrKMAKjtpQ/s1600/dibujo20120728-forever-top-inception-movie.jpg" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"> <img border="0" src="http://lh3.googleusercontent.com/-YSdtH5zn-PA/VYGFBlKfWfI/AAAAAAAABIE/qSrKMAKjtpQ/s640/dibujo20120728-forever-top-inception-movie.jpg" /> </a> </div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-55752485017392673232015-05-29T19:41:00.004+02:002015-05-29T19:41:48.150+02:00Leyendas del rock 2015<div style="text-align: center;">
He adaptado el cartel del leyendas para incluir algunos grupazos que no estaban recogidos.</div>
<br />
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="http://4.bp.blogspot.com/-mxxisjaGGfc/VWikjHckEKI/AAAAAAAABG8/5rsEI7SXcks/s1600/LEYENDAS%2B2015.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" height="341" src="http://4.bp.blogspot.com/-mxxisjaGGfc/VWikjHckEKI/AAAAAAAABG8/5rsEI7SXcks/s640/LEYENDAS%2B2015.png" width="640" /></a></div>
<div style="text-align: center;">
</div>
<div style="text-align: center;">
<a href="http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/es/" rel="license"><img alt="Licencia de Creative Commons" src="https://i.creativecommons.org/l/by-nc/3.0/es/88x31.png" style="border-width: 0;" /></a></div>
<div style="text-align: center;">
Este edición está bajo una</div>
<div style="text-align: center;">
<a href="http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/es/" rel="license">licencia de Creative Commons</a></div>
<div style="text-align: center;">
Reconocimiento-NoComercial</div>
<div style="text-align: center;">
3.0 España.</div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-47357114274712855602015-05-11T15:34:00.001+02:002015-05-13T17:50:04.012+02:00Poesía sobre una foto de Jero<div dir="ltr">
</div>
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Moreno busca moza</div>
<div style="text-align: center;">
de berzas muy lozanas,</div>
<div style="text-align: center;">
para una noche loca</div>
<div style="text-align: center;">
y saciar toas sus ganas.</div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<br />
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Moreno pone choza</div>
<div style="text-align: center;">
pa echarse un pinchito,</div>
<div style="text-align: center;">
absténganse si es gorda</div>
<div style="text-align: center;">
o si esconde un pito.</div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<br />
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Moreno busca chorba</div>
<div style="text-align: center;">
pa hablar y lo que surga,</div>
<div style="text-align: center;">
aun dicho con cuidado</div>
<div style="text-align: center;">
el pene ya ha sacado.</div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<br />
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Moreno quiere almeja</div>
<div style="text-align: center;">
del color de su ceja,</div>
<div style="text-align: center;">
pa que cuando espatarre</div>
<div style="text-align: center;">
no eche patrás el agarre.</div>
<br />
<div dir="ltr">
<br /></div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="http://lh3.googleusercontent.com/-IAIVKpO4i24/VVCv1-wqo3I/AAAAAAAABGI/D0rw627gzbM/s1600/Screenshot_2015-05-11-15-24-47.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"> <img border="0" src="http://lh3.googleusercontent.com/-IAIVKpO4i24/VVCv1-wqo3I/AAAAAAAABGI/D0rw627gzbM/s640/Screenshot_2015-05-11-15-24-47.png" /> </a> </div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-76655584612508121882015-04-09T10:51:00.001+02:002015-05-13T17:49:48.821+02:00Hacer yoga por la mañana con música indie en el salón <div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Hay un extraño haciendo yoga</div>
<div style="text-align: center;">
con música indie en el salón </div>
<div style="text-align: center;">
No estoy borracho, os lo juro copón</div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<br />
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Hay un extraño haciendo yoga</div>
<div style="text-align: center;">
con música indie en el salón </div>
<div style="text-align: center;">
Si lo miro se hace el longui</div>
<div style="text-align: center;">
Y me voy intranquilo a mi habitación</div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<br />
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Hay un extraño haciendo yoga</div>
<div style="text-align: center;">
con música indie en el salón </div>
<div style="text-align: center;">
¿Es un si<u>n</u>techo con mucha cara,</div>
<div style="text-align: center;">
o un compi de piso con cara rara?</div>
<br />
<div dir="ltr">
<br /></div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="http://lh3.googleusercontent.com/-kgAc7FUvRxY/VVE5qYKuESI/AAAAAAAABGk/yGM-6CjwDbA/s1600/funny-animals-doing-yoga-18.jpg" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"> <img border="0" src="http://lh3.googleusercontent.com/-kgAc7FUvRxY/VVE5qYKuESI/AAAAAAAABGk/yGM-6CjwDbA/s640/funny-animals-doing-yoga-18.jpg" /> </a> </div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com1tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-24313027780843904782015-04-08T20:45:00.001+02:002015-05-13T17:49:29.157+02:00Ausente <div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Ausente,</div>
<div style="text-align: center;">
extraído del presente. </div>
<div style="text-align: center;">
Mi binomio cuerpo-mente </div>
<div style="text-align: center;">
deambula entre la gente.</div>
<br />
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Disperso, </div>
<div style="text-align: center;">
escribo verso.</div>
<div style="text-align: center;">
Sin hambre, sueño o intención,</div>
<div style="text-align: center;">
nada recobra mi atención</div>
<br />
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Quiero hacer algo.</div>
<div style="text-align: center;">
Hacerme valer, porque valgo.</div>
<div style="text-align: center;">
Dejar de vagar,</div>
<div style="text-align: center;">
a la deriva como un barco.</div>
<br />
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Estoy ausente, disperso, flotando,</div>
<div style="text-align: center;">
como un barco abandonado.</div>
<div style="text-align: center;">
Donde el presente ya es pasado,</div>
<div style="text-align: center;">
como un barco abandonado...</div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<br />
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="http://lh3.googleusercontent.com/-rApIcCbEAyE/VVE4OPHvCfI/AAAAAAAABGc/wExt_eufOZM/s1600/ar_imagenes_76_co_15850870.jpg" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"> <img border="0" src="http://lh3.googleusercontent.com/-rApIcCbEAyE/VVE4OPHvCfI/AAAAAAAABGc/wExt_eufOZM/s640/ar_imagenes_76_co_15850870.jpg" /> </a> </div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-74553680424656185102015-03-27T21:41:00.000+01:002015-04-07T18:13:26.210+02:00Otro día <div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="http://3.bp.blogspot.com/-KYwFzWC9S_U/U0w5t_YjdJI/AAAAAAAAA7w/6-hZiteIjgI/s1600/12908207.gif" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" src="http://3.bp.blogspot.com/-KYwFzWC9S_U/U0w5t_YjdJI/AAAAAAAAA7w/6-hZiteIjgI/s1600/12908207.gif" /></a></div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<br /></div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Otro día </div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Otro día en el que tu alma esquiva la mía </div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Otro día de introspección para poesía</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Un día en el que me pregunto</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Si podre volver a verte sonreir</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Un día para recordar que te quería</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<br /></div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Otro día de soledad</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Una maldad, o simplemente libertad?</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Libre de compromisos </div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Espero que el caso omiso</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
No sea maldad, sino libertad</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<br /></div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Otro día buscando apoyo</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Apoyo de quienes siempre están ahí </div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Que aunque tanto no me hayan hecho vivir</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Me ayudan mientras mi vida sigo</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<br /></div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Otro día para anhelar la paz</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Recordarla en mi más fuerte amor</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Y aunque sea en amistad,</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
dejar de llorar contigo, a gusto</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
Un día en el que tu alma no esquive la mia</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<br /></div>
<br />Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-30302882202396311002015-03-25T21:32:00.000+01:002018-01-21T14:24:15.478+01:00El cielo está naranja<div dir="ltr">
</div>
<div dir="ltr">
</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="http://1.bp.blogspot.com/-0ts4crw6i9s/VSGvw527r1I/AAAAAAAABFE/-QgmuivU4hg/s1600/AgqNRuUZaZoAo-Po6CTUwBm4erMfQlmaTfQsjDxNvHw-.jpg" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" height="224" src="https://1.bp.blogspot.com/-0ts4crw6i9s/VSGvw527r1I/AAAAAAAABFE/-QgmuivU4hg/s1600/AgqNRuUZaZoAo-Po6CTUwBm4erMfQlmaTfQsjDxNvHw-.jpg" width="320" /></a></div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<div style="text-align: center;">
El cielo está naranja</div>
<div style="text-align: center;">
Naranja sobre ramas</div>
<div style="text-align: center;">
De árboles aún vivos</div>
<div style="text-align: center;">
En la noche de Granada</div>
<br />
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
El cielo está nublado</div>
<div style="text-align: center;">
De lágrimas pasadas</div>
<div style="text-align: center;">
Una lluvia de semanas</div>
<div style="text-align: center;">
Y un corazón helado</div>
<br />
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
El cielo está encendido</div>
<div style="text-align: center;">
De un tono anaranjado</div>
<div style="text-align: center;">
¿Será la luna que se esconde</div>
<div style="text-align: center;">
O no está en mi horizonte?</div>
<br />
<div dir="ltr">
</div>
<div style="text-align: center;">
Es tarde y no entiendo</div>
<div style="text-align: center;">
Cómo sin luz y cuerdo</div>
<div style="text-align: center;">
Veo naranja cuan recuerdo</div>
<div style="text-align: center;">
El cielo en este momento</div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-28665341496467926012015-01-23T16:46:00.003+01:002015-01-23T16:57:42.572+01:00Modificaciones genéticas de bacterias lácticas para la producción de alimentos<b>ÍNDICE</b><br />
Abstract<br />
Introducción<br />
Objetivos<br />
General<br />
Específicos<br />
Plan de trabajo<br />
Metodología<br />
Resultados y discusión<br />
1. Clasificación de las bacterias lácticas<br />
2. Situación de la ingeniería genética aplicada a bacterias lácticas<br />
2.1 Vectores<br />
2.2 Competencia<br />
2.3 Clonado<br />
2.4 Genes registradores en bacterias lácticas<br />
3. Inhibición del ataque por fagos a bacterias lácticas<br />
3.1 Fuentes de contaminación<br />
3.2 Mecanismos moleculares de resistencia a fagos<br />
3.3 Mecanismos preventivos en la industria<br />
3.4 Aislamiento y caracterización de mutantes resistentes<br />
4. Producción de bacteriocinas<br />
4.1 Diseño de la producción de pediocina PA-1 asociada a la nisina<br />
4.2 Otras aplicaciones de bacteriocinas<br />
5. Mejora en la producción de lactato y aromas en fermentaciones<br />
5.1 Producción de diacetilo<br />
5.2 Producción de acetaldehido<br />
6. Modulación de la actividad imunitaria mediada por probióticos<br />
7. Otras aplicaciones<br />
8. Fuentes, aislamiento, caracterización y evaluación de probióticos<br />
9. Perspectivas futuras<br />
Conclusiones<br />
Conclusions<br />
Referencias<br />
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="http://3.bp.blogspot.com/-Jclfr2AcC0I/VMJvaRa-fBI/AAAAAAAABDM/w0hfHjxbw3k/s1600/PORRTADA_Streptococcus%2Bthermophilus.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" src="http://3.bp.blogspot.com/-Jclfr2AcC0I/VMJvaRa-fBI/AAAAAAAABDM/w0hfHjxbw3k/s1600/PORRTADA_Streptococcus%2Bthermophilus.png" height="226" width="320" /></a></div>
<br />
<br />
<b>ABSTRACT</b><br />
By the time the acid lactic bacteria (LAB) had been identified as probiotics in 1989, genetic<br />
engineering was a brand-new science with lots of new techniques that allowed the design of LAB<br />
strains able to control the infection from phages and pathogens and enhance some genes useful in<br />
the dairy industry. These strains can activate an inmune response in its host. Moreover they can<br />
provide biophisical and organoleptic properties in the foods present in industry.<br />
<br />
In this review, the current engineering applied to the LAB is evaluated, as well as the molecular and<br />
industrial mechanisms against phage attack at the LAB will be described, because nowadays, the<br />
former issue is an important problem for dairy industry. Finally, there are designed some bacteria<br />
producing pediocin PA-1, a food preserver, and finally, there are suggested some future perspectives<br />
and benefics provided by LAB.<br />
<br />
<i>Keywords</i>: lactic acid bacteria, probiotics, inhibitory proteins, lactic acid.<br />
<br />
<b>INTRODUCCIÓN</b><br />
Las bacterias lácticas (BAL) son un grupo heterogéneo de bacterias gram-positivas (Gram-(+))<br />
clasificado por su fenotipo, que es producir ácido láctico a partir de la fermentación de azúcares de<br />
componentes alimentarios como la glucosa. Son, por tanto, bacterias indispensables para la<br />
producción de alimentos fermentados, especialmente lácteos, productos cárnicos, panarios, y otras<br />
bebidas fermentadas como el vino. Hay hasta de órdenes filogenéticos diferentes, y unas producen<br />
ácido L-(+)-láctico, y otras D-(-)-láctico.<br />
<br />
Las BAL que viven en el intestino humano, y controlan el balance de su microbiota con efectos<br />
fisiológicos y beneficiosos sobre la salud, reciben el nombre de probióticos. Algunos tipos de<br />
probióticos se recogen en la figura 1.<br />
<br />
Las BAL como probióticos, por tanto, son<br />
microorganismos vivos que proveen beneficios a<br />
su hospedador ingeridos en cantidades<br />
adecuadas(2), por lo que son consideradas como<br />
GRAS (Generally Recognised As Safe)(1). La<br />
figura 2 recoge un diagrama de flujo para<br />
considerar a un microorganismo como probiótico. Figura 1: Tipos de probióticos(1).<br />
<br />
Su importancia en la mucosa gastrointestinal reside en que ésta tiene una gran variedad de<br />
funciones, como por ejemplo proteger al hospedador de infecciones patógenas, o proveer un hábitat<br />
para bacterias intestinales útiles. Gracias a la ingeniería genética, y debido a la inocuidad de las<br />
BAL, es especialmente útil transferirles genes de otros organismos que aporten un fenotipo<br />
deseable. Para ello se consideran diferentes sistemas vector-hospedador.<br />
<br />
Entre las aplicaciones de las BAL en la industria láctea, podemos destacar la producción de<br />
bacteriocinas(3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13), diacetilo(14, 15, 16), su modulación de la respuesta<br />
inmunitaria(1, 2, 17, 18), producción de lantibióticos(14), inhibidor de la enzima convertidora de<br />
angiotensina(5), y multitud de otros aditivos(14). En la figura 3 se recogen algunos mecanismos de<br />
acción de los probióticos.<br />
<br />
En ellas pueden expresarse además genes no sólo del ámbito que nos atañe de la alimentación, sino<br />
de cualquier ámbito en el que sea útil su fermentación autónoma, como para hacerlas resistentes a<br />
fagos(19, 20, 21, 22, 23), según se verá más adelante.<br />
<br />
<b>OBJETIVOS</b><br />
<b>OBJETIVO GENERAL</b><br />
La finalidad de esta memoria es revisar diversas estrategias para la modificación genética de<br />
bacterias productoras de ácido láctico, así como identificar sus aplicaciones en la industria de la<br />
alimentación. Particularmente, se presta atención a las variedades de bacterias probióticas que<br />
permiten la producción de alimentos específicos, o que desempeñan una función beneficiosa local o<br />
sistémica para el huésped.<br />
<br />
<b>OBJETIVOS ESPECÍFICOS</b><br />
– Revisar el repertorio de BAL útiles en alimentación.<br />
– Evaluar los avances de la ingeniería genética asociados a la producción de nuevos alimentos<br />
gracias a la utilización de BAL y las características de sus vectores tanto crípticos como<br />
mejorados y nuevos vectores.<br />
– Identificar los genes de interés potencial en alimentación que pueden ser transfectados y<br />
expresados en BAL.<br />
– Citar ejemplos de aplicaciones específicas de herramientas bioquímicas útiles para el<br />
desarrollo de BAL de interés para la alimentación, como es dotar resistencia a fagos,<br />
producir bacteriocinas, ácidos orgánicos, aromas, o péptidos de interés, asñi como bacterias<br />
probióticas con propiedades mejoradas incluyendo la estimulación del sistema inmunitario.<br />
<br />
<b>PLAN DE TRABAJO</b><br />
En primer lugar, se eligió realizar un tabajo fin de grado cuya finalidad sería elaborar una revisión<br />
bibliográfica sobre bacterias lácticas aplicadas a la alimentación, desde un punto de vista<br />
bioquímico.<br />
<br />
Para ello, se enfocaron los trabajos de seminario de asignaturas relacionadas con esta temática a<br />
priori de la memoria, para tener conocimientos multidisciplinares desde la virología, la biología<br />
molecular de la alimentación y la ingeniería de proteínas.<br />
<br />
Una vez comenzó el cuatrimestre en el que se asigna la elaboración de esta memoria, se concertó<br />
una cita con el tutor para definir los objetivos y patrones de búsqueda, así como para establecer una<br />
serie de citas de seguimiento en la elaboración de esta memoria.<br />
<br />
De forma sistemática y razonada, se redactaron resumenes de las fuentes más relevantes, y con<br />
ayuda de las tutorías de seguimiento, se fue definiendo la estructura y el contenido de la presente<br />
memoria.<br />
<br />
<b>METODOLOGÍA</b><br />
Se buscaron revisiones o ''reviews'' con la base de datos Scopus, conteniendo la palabra ''lactic acid<br />
bacteria'', y ''cloning''. Primero desde 2002, para situar el contexto del surgimiento de los<br />
probióticos(1). Aparecieron sólo 8 resultados de búsqueda, de los cuales se tomaron los artículos que<br />
componen las refs. 1 y 24. A continuación se buscaron artículos con las palabras clave ''lactic acid<br />
bacteria AND genetic food'' publicados en 2014, de los que se tomaron las refs. 4, 5.<br />
Respecto al apartado de resistencia a fagos, se utilizó la ecuación ''acid lactic bacteria'' AND<br />
''phage'' en artículos desde 2004, apareció un artículo en la base de datos Embrapa (ref. 25) que<br />
referenciaba a un artículo muy citado (ref. 26), del cual se tomó gran parte del trabajo, junto a<br />
artículos relacionados (refs. 19, 22, 26, 27, 28 y 29). Luego se editaron algunas figuras de las refs.<br />
21, 27, 30 y 31.<br />
<br />
Para elaborar el apartado de la pediocina, se utilizaron también bases de datos de secuencias y de<br />
proteínas, programas de edición de secuencias como EMBOSS y figuras hechas a mano a partir de<br />
datos en publicaciones. Las bases de datos de secuencias y de proteínas utilizadas componen las<br />
refs. 12, 32 y 33. El programa EMBOSS es la ref. 34.<br />
<br />
También se han buscado imágenes de artículos científicos desde Scopus y el buscador de PubMed<br />
(refs. 1, 2, 3, 10, 12, 15, 21, 26, 31, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42). El procesado de los textos<br />
científicos, por otra parte, se diseñó un programa informático con Lazarus, a disposición de quien lo<br />
solicite al autor de este trabajo fin de grado, en el que se procesa el espaciado de las publicaciones<br />
para dejarlas en texto plano y en cómodos párrafos, para ser leídos en documentos de texto aislados.<br />
Para ampliar pequeños matices de apuntes de clase respecto a la producción de diacetilo, se hizo<br />
una búsqueda concreta con Google Académico en un par de artículos.<br />
<br />
Las refs. 43 y 44 se obtuvieron desde Google Académico.<br />
<br />
Todas las referencias fueron procesadas con el programa informático compiado desde Lazarus. De<br />
forma adicional, se usaron apuntes de clase aportados por el tutor de este trabajo fin de grado (ref.<br />
14), así como artículos referentes a probióticos de su grupo de investigación (refs. 2, 3) y de Scopus<br />
como motor de búsqueda para el 80% de los artículos citados.<br />
<br />
<b>RESULTADOS Y DISCUSIÓN</b><br />
<b>1. CLASIFICACIÓN DE LAS BACTERIAS LÁCTICAS</b><br />
La clasificación filogenética que impera desde hace años la recogen los tomos de Bergey's of<br />
Systematic Bacteriology, aunque hace unos 20 años se estableció una clasificación diferente de las<br />
bacterias, en concreto por el tipo de hidrato de carbono que fermentaban(45).<br />
<br />
Hay BAL con propiedades funcionales características de la cepa a la que pertenezcan, debido a la<br />
variabilidad genética entre ellas. Algunas BAL definen las diferentes variedades de productos<br />
lácteos fermentados, como por ejemplo quesos, cuya textura y características sensoriales están muy<br />
influenciadas por la población de microorganismos, sobre todo de BAL mesofílicas(24).<br />
<br />
Otras, por ejemplo, pueden usarse para producir azúcares simples a través de la digestión de<br />
oligosacáridos. Hay BAL incluso en la leche materna, donde determinadas cepas pueden fermentar<br />
sus oligosacáridos complejos, y son consideradas como prebióticos (un prebiótico es un nutriente,<br />
en este caso un hidrato de carbono, producido por un probiótico)(14).<br />
<br />
Las BAL encontradas durante la maduración del queso, son referidas colectivamente como BAL no<br />
iniciadoras (NSLAB). Son especies involucradas en la formación de sabor y su composición varía<br />
con los procesos aplicados a la leche y con la edad del queso. Son más frecuentes en quesos hechos<br />
con leche cruda que en leche pasteurizada, y dominantes en muchos quesos madurados(24).<br />
<br />
Actualmente las más utilizadas en alimentación son de los órdenes Lactobacillus sp.,<br />
Bifidobacterium sp., Lactococcus sp., Enterococcus sp., y Streptococcus sp.<br />
<br />
El grupo de BAL denominado Lactobacillus acidophilus, en el cual destacan Lb. salivarius, Lb.<br />
casei, Lb. plantarum, Lb. fermentum(16), Lb. reuteri y Lb. brevis, es el más frecuentemente aislado<br />
en el intestino humano(1).<br />
<br />
Hay cepas comerciales de Lb. delbrueckii (figura 4) sensibles a fagos, de importancia para el<br />
sistema inmunitario debido a su comprobada inducción de IgA en ratones. Según la cepa, tiene<br />
diferente tolerancia a sales biliares, lisozima y condiciones ácidas (aunque todas sobreviven a pH 3,<br />
que es el grado de acidez medio de la mucosa gástrica), lo que<br />
afecta a la viabilidad celular de 2 a 4 órdenes de magnitud(46).<br />
<br />
Muchas cepas de Bifidobacterium sp., han sido usadas durante<br />
milenios en productos de leche natural y fermentada con la<br />
acertada esperanza de que sirviesen como probióticos por su<br />
supervivencia y crecimiento en el tracto gastrointestinal. Aún en<br />
la actualidad, se añaden como cultivo adjunto en productos de<br />
alimentación debido a su potencial para mantener el balance de salud intestinal. Sus grupos son<br />
clasificados filogenéticamente y por la composición de su pared celular (PC) en 6 subgrupos(1).<br />
<br />
Encontramos especies como B. breve, B. infantis - presente en preadolescentes -, B. liberorum, B.<br />
longum - porque tiene fragmentos genéticos largos-, y B. animalis(14). Pese a esta diversidad y su<br />
uso milenario, las bifidobacterias aún están pobremente estudiadas a nivel genético, en comparación<br />
con otros microorganismos de interés industrial(47).<br />
<br />
También hay Propionibacterium sp. que generan burbujas de CO2 en diversos tipos de quesos como<br />
gruyer y emmental, gracias al dióxido de carbono resultante de la fermentación(14), pertenecientes<br />
junto a las Bifidobacterium a la subclase de Actinobacteridae(45).<br />
<br />
Lactococcus lactis subsp. lactis (figura 5) y sus biovariantes Lc diacetylactis, y Lc. lactis subsp.<br />
cremoris, son usados ampliamente tanto en biotecnologías aplicadas modernas, como en la<br />
producción de quesos, mantequillas y leches fermentadas, con unos registros de seguridad<br />
excelentes. Rara vez se asocian con infecciones, y han sido considerados GRAS(1).<br />
<br />
En Lactococcus lactis se ha estudiado uno de los mejores sistema caracterizados de resistencia<br />
natural a fagos, el Sie2009, que confiere resistencia al grupo 936 genéticamente distinto de fagos(28).<br />
Dicho sistema se ha identificado en el genoma del fago<br />
atemperado Tuc2009, y encontrado posteriormente en otros<br />
profagos en los genomas de varios de sus cepas(28).<br />
<br />
Las especies de Enterococcus sp. son una parte relevante de las<br />
comunidades microbianas de quesos artesanales, influenciando<br />
las características sensoriales del producto final(24).<br />
<br />
En cuanto a Stereptococcus sp., merece una especial mención Figura 5: Lc. lactis en división(40).<br />
S. thermophilus (figura 6) por ser una de las LAB termofílicas más importantes en la industria<br />
láctea. Se ha observado que posee una baja tasa de mutaciones generadoras de bacterias mutantes<br />
fago-resistentes.<br />
<br />
Streptococcus cremoris es una especie de BAL con la peculiaridad de que su sistema de<br />
restricción/modificación (R/M) de fagos no está codificado por<br />
plásmidos. No obstante, la mayoría de cepas presentan<br />
plásmidos, excepto el isoesquizómero ScrFI - Lla4971 de esta<br />
especie, asociado a las características fenotípicas de la cepa(26).<br />
<br />
<b>2. SITUACIÓN DE LA INGENIERÍA GENÉTICA APLICADA A BACTERIAS</b><br />
<b>LÁCTICAS</b><br />
La ingeniería genética es la tecnología del control y transferencia de DNA de un organismo a otro, y<br />
permite la producción directa de pequeñas moléculas en bacterias(6). En la actualidad, es posible<br />
insertarles genes a BAL mediante vectores plásmídicos, siempre que sean células competentes, y<br />
una vez introducido, clonarlas para conseguir cepas iniciadoras de interés industrial. Finalmente, se<br />
pueden identificar en el producto lácteo deseado, y aportar las características deseadas(50).<br />
<br />
<b>2. 1. Vectores de bacterias lácticas</b><br />
Para que el DNA recombinante se mantenga en la nueva célula hospedadora, debe ser o bien capaz<br />
de replicarse e integrarse en el cromosoma, o estar embebido en un plásmido circular cerrado<br />
covalentemente, como ocurre en la mayoría de ocasiones. Se hará una especial mención a los<br />
plásmidos de especial interés para la transfección de genes a BAL: plásmidos promiscuos,<br />
autotransmisibles, duales, crípticos, y por último a los cósmidos.<br />
<br />
Los plásmidos promiscuos, originariamente denominados plásmidos autotransmisibles, transfectan<br />
a un rango de bacterias Gram(-) en las que se mantienen de forma estable, como es el caso de los<br />
plásmidos α IncP RP4, RP1 o RK2 (anexo 1). Los plásmidos autotransmisibles se han identificado<br />
en multitud de géneros de bacterias Gram(+), y su tasa de transferencia es menor que la de Gram(-),<br />
posiblemente debido a que tienen una pared celular (PC) más simple(6).<br />
<br />
Los plásmidos duales, también conocidos como plásmidos de amplio espectro, son plásmidos<br />
mixtos construídos desde una especie convenientemente de crecimiento más rápido que las BAL,<br />
por ejemplo Escherichia coli, y la BAL de interés donde queremos expresar el gen que porta el otro<br />
plásmido. Un ejemplo es pBR332. Tienen la ventaja añadida de ser integrables en los especies<br />
donde se encuentran ambos plásmidos(14).<br />
<br />
Los plásmidos crípticos son plásmidos que no tienen un efecto aparente en el fenotipo de la célula<br />
hospedadora, pero se replican y transmiten a otras células. Pueden utilizarse para portar genes de<br />
resistencia a fagos, como la nisina(48).<br />
<br />
Pese a las ventajas que aportan los plásmidos, aún pueden realizar una transferencia genética<br />
inestable(6) en sistemas de defensa donde hay tanto cepas muy vulnerables a su fago como cepas<br />
resistentes. Éste problema es conocido como inestabilidad segregacional: hay células que, al<br />
dividirse, pueden aportar los 2 plásmidos a una sola célula hija, y a la otra ninguno(14).<br />
<br />
Esto conlleva a que en una línea celular no dotan de resistencia al fago añadir al plásmido los genes<br />
de la conjugación mob, gracias a los cuales se forma un puente entre las células hijas y se evita la<br />
segregación del plásmido(14).<br />
<br />
Otro tipo de vectores de interés son los cósmidos (figura 7). Son<br />
plásmidos que se empaquetan en partículas de fago λ portadoras<br />
del gen cos, cuyo DNA recombinante se inyecta y circulariza<br />
como un fago, pero se replica como un plásmido normal sin la<br />
expresión de las funciones fágicas indeseables. Proveen una<br />
forma eficiente de clonar grandes fragmentos de DNA, y<br />
permite unir varios fragmentos de genoma para contener clones<br />
que originariamente no se encontraban en el hospedador(6).<br />
<br />
<b>2. 2. Estado de competencia de bacterias lácticas</b><br />
En cuanto a la competencia de las BAL a transfectar, es un fenómeno transitivo que existe en<br />
muchas especies de forma natural. Puede ser dependiente de secuencia, e involucra la unión de la<br />
nucleasa al dúplex de DNA y la degradación de una de las 2 cadenas, por lo que sólo puede entrar<br />
una cadena lineal en la célula. Un método para mejorar su mantenimiento es formar híbridos de<br />
plásmidos heterólogos con plásmidos que se encuentran en la BAL hospedadora en la naturaleza(6).<br />
<br />
Pese a ser fácil que entre el DNA a un huésped competente mediante técnicas como la transfección<br />
con calcio (Ca2+) en frío de enterobacterias como E. coli, al tener las BAL una pared más grande<br />
porque son Gram(+), la forma de transformarlas es difícil(14).<br />
<br />
<b>2. 3. Clonado de bacterias lácticas</b><br />
Una vez las BAL son competentes, puede ser clonado el gen de interés en su interior. Para ello hay<br />
tres requisitos indispensables. Primero, necesitamos identificar un método para introducir el DNA<br />
de interés en el receptor potencial, como la transformación, la conjugación (figura 8) y la<br />
electroporación(49). Seguidamente, el DNA introducido debe ser mantenido en el nuevo hospedador,<br />
en forma de replicón, o a través de un plásmido donde se introduzca el gen de interés, que debe<br />
integrarse en el genoma de la BAL hospedadora mediante el ciclo lisogénico del plásmido(6).<br />
<br />
Finalmente, el uso y mantenimiento de los genes clonados sólo<br />
será detectado si se expresan. Para clonar en bacterias Gram(+)<br />
no entéricas, por tanto, se necesitan plásmidos de un hospedador<br />
intermedio como puede serlo E. coli(6), en cuyo caso estaríamos<br />
realizando una expresión heteróloga del gen de interés.<br />
<br />
Un ejemplo para transfectar BAL es la posibilidad de hacer<br />
esferoplastos o protoplastos hidrolizando enzimáticamente la PC<br />
de la Gram-(+) en cuestión, que luego se regenera. Con sólo su<br />
membrana plasmática desnuda, dejan de ser bastoncillos o cocos,<br />
y se vuelven esféricos debido a su mayor estabilidad. Entonces puede inyectársele DNA mediante<br />
los métodos citados previamente(14).<br />
<br />
<b>2. 4. Genes registradores en bacterias lácticas</b><br />
Para identificar a BAL en el producto lácteo deseado, se han desarrollado recientemente una gran<br />
cantidad de herramientas moleculares aplicadas a detectar la abundancia tanto cualitativa como<br />
cuantitativa de genes de BAL, y a evaluar cómo interaccionan éstas con el medio ambiente(14).<br />
<br />
Para el marcaje, ha de cuidarse no usar genes de resistencia a antibióticos en alimentación como la<br />
ampicilina, porque podría transmitirse a otras bacterias, y dejarían de ser GRAS. Se podría sin<br />
embargo usar como marcador el gen para la proteína fluorescente verde (GFP)(14). Dicha GFP<br />
permite la evaluación en tiempo real de especies de Bifidobacterium, in vivo. Excita a un cofactor<br />
de flavin-mono-nucleotido (FMN) denominado evoglow-Pp1, fluorescente tanto en condiciones<br />
aerobias o anaerobias(47).<br />
<br />
El vector reportero utilizado con la GFP, pNZ:Tu-GFPana, se basa en que el plásmido pNZ8048<br />
hospeda un promotor de Bifidobacterium sp., el factor de elongación EF-Tu de B. longum CECT<br />
4551. pNZ:Tu-GFPana fue construido y plegado, analíticamente de forma estable y funcional, en B.<br />
longum CECT 4551 y en cepas intestinales de B. breve INIA P734(47).<br />
<br />
Aparte de éste promotor, o el del fago T7 en el caso de los cósmidos, se pueden utilizar vectores ya<br />
presentes en las bacterias, como el de la β-galactosidasa(16). Diversas técnicas de detección de BAL<br />
en productos fermentados se describen en la siguiente tabla(24).<br />
<br />
Basándonos en el conocimiento actual de la regulación metabólica, podemos predecir que los<br />
cambios en las cepas mejoradas pueden involucrar la eliminación de controles alostéricos y<br />
limitantes de la transcripción; la mejora de la cinética enzimática; la inhibición genética de rutas<br />
metabólicas (por ejemplo, diseñando bacterias auxótrofas resistentes a un antimetabolito tóxico que<br />
añadimos al medio. Este inhibe alostérica y específicamente al centro activo de la primera enzima<br />
de una ruta metabólica no deseada); la mejora del uso de carbono en el metabolismo primario del<br />
metabolismo central; y la mejora del transporte del producto fuera de la célula(6).<br />
<br />
Un ejemplo útil de genes registradores en BAL es el secuenciado de genes codificantes para la<br />
subunidad 16S de los RNA ribosómicos (rRNA) de comunidades de BAL en productos lácticos<br />
como quesos. Muchas investigaciones se han basado en el análisis de éste rRNA y sus genes<br />
codificantes, de forma satisfactoria(24).<br />
<br />
<b>3. INHIBICIÓN DEL ATAQUE POR FAGOS A BACTERIAS LÁCTICAS</b><br />
La presencia de fagos en cultivos de BAL es a veces inevitable, ya que la leche pasteurizada no es<br />
estéril ni aséptica. Sus fagos dispersos, puede bajar o incluso detener la producción ácida en BAL,<br />
con la consecuente pérdida económica(25, 26).<br />
<br />
Teniendo en mente la ubiquidad y diversidad de fagos<br />
en cuanto a las posibles dificultades que se puedan<br />
generar en la fermentación, es más asequible intentar<br />
controlarlos eficientemente en lugar de su completa<br />
eliminación(26). Varios fagos se muestran en la figura 9.<br />
<br />
Las fermentaciones con Lc. lactis, y recientemente<br />
Streptococcus thermophilus, son atacadas con<br />
frecuencia por dichos fagos. Para proteger a estos<br />
cultivos iniciadores útiles en alimentación, es crucial<br />
el conocimiento de sus fagos infectivos, la interacción<br />
de éstos fagos con el hospedador, los mecanismos de<br />
defensa a fagos que afectan a fermentaciones<br />
industriales y el desarrollo de mutantes insensibles a<br />
fagos (BIMs)(26).<br />
<br />
A nivel de la mucosa intestinal, hay cepas comerciales<br />
de Lb. delbrueckii sensibles a fagos de importancia<br />
inmunitaria debido a su comprobada inducción de IgA<br />
en ratones.<br />
<br />
<b>3.1. Fuentes de contaminación</b><br />
Los fagos pueden provenir de diversas fuentes. Cualquier ingrediente natural que entra en una<br />
instalación de fermentación puede contener fagos, aunque a niveles bajos. Entre ellos se encuentran<br />
la leche cruda, los sueros, el cultivo iniciador y el aire.<br />
<br />
La leche cruda es tanto un nicho ecológico de algunas BAL como de fagos. Dado que se obtiene de<br />
diferentes granjas, la biodiversidad fago se amplifica en silos de leche. Además los fagos se pueden<br />
propagar fácilmente en este medio líquido y en medios de tipo gel. Por tanto, se necesitan sólo unas<br />
pocas células sensibles a aumentar rápidamente los niveles de fagos en un entorno determinado(50).<br />
Se han detectado fagos de Lactococcus sp. y Streptococcus sp. mediante una PCR múltiple en el 37<br />
% de las muestras de leche utilizadas para la producción de yogur en España, especialmente de Lc.<br />
lactis. Estos números pueden ser más altos en las muestras de suero de leche o productos finales, ya<br />
que los fagos se pueden propagar durante la mayoría de los procesos de fermentación. Se han<br />
titulado hasta 109 UFC/mL de suero de queso(50).<br />
<br />
Cuando un fago atemperado entra en una cepa iniciadora, puede iniciar el ciclo lítico en lugar del<br />
lisogénico. Diferentes tensiones bacterianas tales como calor, sales, antimicrobianos, la falta de<br />
nutrientes o UV pueden inducir el profago y desencadenar el ciclo lítico(50).<br />
<br />
Finalmente, otra vía de difusión de contaminantes puede ser aérea, que es más complicada de<br />
identificar. La mayor cantidad de leche procesada diariamente se da en cubas abiertas para producir<br />
queso, y junto al procesamiento de suero de leche, se forman inevitablemente aerosoles y<br />
salpicaduras que pueden exponer a fagos. Cinco muestras de aire fueron probados recientemente en<br />
una fábrica de queso y se encontrarion fagos en las muestras de lactococos, utilizando qPCR(50).<br />
<br />
<b>3.2. Mecanismos moleculares de resistencia a fagos</b><br />
Para facilitar el estudio de los métodos empleados para evitar las contaminaciones por fagos en la<br />
industria, este apartado se estructura en mecanismos moleculares, los cuales están recogidos en la<br />
figura 10, y en métodos preventivos de la industria.<br />
Hay BAL mutantes por selección natural capaces de mejorar la<br />
resistencia a fagos, y de inmunoestimular a la mucosa gástrica.<br />
Además, se ha sugerido que las proteínas de la leche actúan de modo<br />
protector, mientras que una mayor concentración de sal o grasa<br />
no aumenta la resistencia de los fagos al calor(26). Todo esto<br />
hace a las BAL buenas candidatas para aplicaciones industriales en<br />
alimentos funcionales(20).<br />
<br />
<b><i>3.2.1. Interferencia con la adsorción de fagos, e inhibición de la inyección de DNA</i></b><br />
El ciclo infectivo de los fagos se inicia con su adsorción a la superficie celular, y la entrada de su<br />
material genético a través de membrana por inyección en el citoplasma de la célula hospedadora. La<br />
interferencia en los pasos iniciales como la adsorción, se ha estudiado en Lactococcus sp. Los<br />
mecanismos más destacados son el sistema Sie2009 y similares, y los genes de resistencia<br />
codificados por los plásmidos pME0030, pCI528, pSK112, pKC50 y pNP40. Desafortunadamente<br />
sólo se ha estudiado la naturaleza genética o química de las mutaciones del plásmido pNP40. El<br />
resto deberían ser caracterizadas a nivel molecular(26).<br />
<br />
Hasta el 2010, sólo se han identificado unos pocos ejemplos de mecanismos que inhiben la<br />
inyección de DNA de fago en bacterias Gram-(+). La mayoría fueron identificados en Lc. lactis. El<br />
mejor sistema caracterizado, como ya se comentó previamente, es Sie2009, diseñado para el fago<br />
Tuc2009, cuyos efectos se visualizan en la figura 11. Éste confiere resistencia a nivel de membrana<br />
a un grupo genéticamente distinto de fagos de Lactococcus sp. (el grupo 936) predominante en<br />
cepas de Lc. lactis específicas de la industria láctea(28).<br />
<br />
Los sistemas Sie proporcionan resistencia al inhibir la transferencia de DNA del fago al genoma de<br />
la BAL hospedadora, y fueron identificados tanto en el genoma del fagoatemperado de<br />
Lactococcus sp., Tuc2009 y fueron identificados tanto en él, como en otros profagos en los<br />
genomas de varios cepas de Lc. lactis(28).<br />
<br />
Un sistema similar a Sie se ha descubierto recientemente en el profago de S. thermophilus, otra<br />
especie de bacterias utilizadas en procesos industriales de fermentación láctica. El profago TP-J34<br />
codifica para la lipoproteína LTP, que bloquea la inyección del DNA del fago en la célula, y<br />
confiere resistencia a algunos fagos de Lactococcus sp. cuando se transforma en Lc. lactis(28).<br />
<br />
Respecto al plásmido pNP40, caracterizado a nivel molecular, se ha comprobado que codifica para<br />
una proteína de membrana que evita la penetración del DNA del fago de cabeza alargada c2. La<br />
proteína de infección del fago, por su parte, es referida como pip, y recientemente se ha visto que<br />
cuando un mutante espontáneo resistente a fagos de Lc. lactis c2 se transforma con un plásmido<br />
recombinante con pip, la sensibilidad a fagos se recupera(26).<br />
<br />
Podemos por tanto diseñar un mutante del gen pip, que se ha demostrado que provee de una<br />
resistencia completa al fago c2, que no afecta al crecimiento celular en cepas de Lc. lactis, aunque<br />
no es válido para luchar contra los fagos P335, 936 o 949(26).<br />
<br />
<b><i>3.2.2. Infección abortiva</i></b><br />
La infección abortiva (Abi) es un mecanismo de resistencia natural a fagos previo a la adsorción y a<br />
la inyección del DNA fágico. Los sistemas de Abi proporcionan resistencia a los fagos mediante la<br />
muerte celular masiva. Son muy diversos, se han descrito hasta 23 en Lactococcus sp(22). Se pondrá<br />
como ejempo AbiV.<br />
<br />
Con la caracterización fenotípica en Lactococcus sp. (donde se encuentran la mayoría de<br />
mecanismos de Abi junto a E. coli) se demostró con la Abi una reducción en la eficiencia de las<br />
placas del fago (EOP) unas 9 órdenes de magnitud, en su tamaño, en la eficiencia de los centros de<br />
infección (ECOI). Además, las resistentes a la Abi mueren nada más infectarse, limitando la<br />
propagación del fago(22).<br />
<br />
Su estudio, sin embargo, varía en función de la especie en concreto de Lactococcus sp., pues así lo<br />
hace el tipo de fago afectado, la regulación, el tamaño, la naturaleza, y la cantidad necesaria para<br />
alcanzar actividad de la proteína de Abi, aunque el %G+C es similar entre Lactococcus sp.con Abi.<br />
Algunos sistemas en estudio son AbiD1, AbiK, AbiP y AbiZ. Más ejemplos de Abi en el anexo 2 (26).<br />
El más novedoso es AbiV, un sistema que puede transferirse de forma natural entre Lc. Lactis, y que<br />
a diferencia de la mayoría de sistemas Abi (que son plásmidos codificados), está codificado<br />
cromosómicamente. Es silencioso en Lc. lactis MG1363 pero puede ser espontáneamente activado<br />
debido a la reorganización de la región promotora. La secuenciación del genoma completo de los<br />
mutantes de fago insensibles a AbiV reveló una mutación en un gen llamado sav, que codifica para<br />
el polipéptido SaV. Su sobreexpresión produce un efecto tóxico a la células rápidamente, pero si el<br />
fago no puede generar SaV, el sistema AbiV no funciona(22).<br />
<br />
<b><i>3.2.3. Restricción y modificación</i></b><br />
Los sistemas de restricción/modificación (R/M) son sistemas naturales de defensa a fagos que<br />
reconocen una secuencia nucleotídica específica, incluyen metilasas que modifican el sitio de<br />
reconocimiento del fago por parte de la BAL hospedadora, y una endonucleasa de restricción<br />
digiere de forma sitio-específica el DNA no modificado. Sirven como defensa a fagos limitando la<br />
adquisión del plásmido por transformación y conjugación, aunque no electroporación. Muchos<br />
fagos, en contra de lo que podría intuírse, utilizan los sistemas R/M para ser replicados, o desarrolan<br />
resistencia a los mismos(26).<br />
<br />
Existen 3 tipos de dianas que afectan al DNA viral en los sistemas R/M: la inhibición de su<br />
replicación y transcripción, la interferencia con las proteínas fágicas en su síntesis y ensamblaje, y<br />
la inferferencia con la lisis bacterial inducida por el ciclo lítico del fago. Algunos ejemplos de<br />
especies con dichos sistemas son S. cremoris, S. thermophilus, Lb. helveticus, y Lactococcus sp. Se<br />
exponen diferentes ejemplos de sistemas R/M en Lc. lactis en el anexo 3, y técnicas de biología<br />
molecular para sistemas R/M en el anexo 4(26).<br />
<br />
Tras un análisis de la amplificación aleatoria por DNA polimórfico (RAPD-PCR) se han<br />
caracterizado 100 mutantes espontáneos resistentes a fagos a partir de 9 cepas comerciales de S.<br />
thermophilus potencialmente mejoradas para su uso industrial. La naturaleza de su resistencia fue<br />
integrar el fago por lisogenia (su genoma puede integrarse en el cromosoma bacteriano y seguir su<br />
multiplicación) desde mecanismos R/M(27).<br />
<br />
Para mutantes resistentes de la cepa I49 de S. thermophilus y con el fago Ψ49 se encontraron fagos<br />
libres en el medio capaces de infectar a la cepa parental pero no I49. Esto sugirió que el fenotipo<br />
resistente podía estar ligado a la integración del fago en el genoma de S. thermophilus, generando<br />
un posible mecanismo de resistencia anti-fago asociado a la lisogenia. Este mecanismo es común en<br />
lactococci y lactobacilli, pero no se había encontrado en S. thermophilus.<br />
<br />
<b><i>3.2.4. Sistema antifago CRISPR/Cas</i></b><br />
Un interesante sistema natural antifago es el CRISPR/Cas, encontrado en E. coli en 1987, que le<br />
ofrece resistencia a fagos a S. thermophilus. CRISPR proviene de las siglas de “Clustered regularly<br />
interspaced short palindromic repeats“, o loci con repeticiones palindrómicas cortas agrupadas<br />
regularmente a lo largo de varias proteínas Cas (CRISPR-associated). Representan una<br />
manifestación común del sistema inmunitario en eubacterias y arqueas(30).<br />
<br />
Los loci CRISPR evolucionan a<br />
través de la incorporación de<br />
espaciadores, o secuencias de DNA<br />
corta, derivados principalmente de<br />
DNA extracromosómico, tales como<br />
fagos o secuencias de plásmido. Figura 12. Locus de los genes CRISPR(30).<br />
<br />
La composición de los locus de CRISPR está ilustrada en la figura 12. Un transcrito CRISPR se<br />
escinde por las repeticiones de proteína Cas con o sin otras proteínas del huésped para producir<br />
RNAs pequeños. Estos pequeños RNAs maduros y proteínas Cas, guían y cortan en una secuencia<br />
patrón el DNA invasor para garantizar la defensa celular. Éste sistema es potencialmente útil contra<br />
cualquier tipo de fago.<br />
<br />
<b>3.3. Mecanismos preventivos en la industria</b><br />
La industria láctea ha desarrollado una serie de precauciones y métodos para reducir la<br />
susceptibilidad al ataque por fagos: la desinfección habitual del instrumental, el diseño de cepas<br />
resistentes a múltiples fagos y su rotación, la propagación de cultivos iniciadores en medio inhibidor,<br />
el uso de membranas para separar los componentes de suero de leche (retienen fagos por<br />
ultrafiltración y/o microfiltración(50)) y el cerrado de los tanques tras la inoculación directa de las<br />
BAL(26).<br />
<br />
<b><i>3.3.1 Desinfección del tanque de fermentación</i></b><br />
Para la desinfección del tanque, resulta útil calentarlo, pues puede reducir en gran medida la<br />
actividad de partículas de fagos al liberar el DNA y cambiar su morfología. Sin embargo, se sabe<br />
que muchos fagos de LAB no se inactivan por procedimientos de pasteurización clásicos. También<br />
puede reducirse sustancialmente la cantidad de fagos de un tanque, por el efecto de las altas<br />
presiones dinámicas (100 MPa y superiores). Sin embargo, los efectos son variables incluso en el<br />
mismo grupo de fagos(26).<br />
<br />
Hay numerosos biocidas que actúan como desinfectantes. Entre ellos destacan el ácido peracético,<br />
seguido del etanol, isopropanol e hipoclorito de sodio, éste último con efectos más variables. Otros<br />
biocidas utilizados son NH4Cl (3%, pH 10.5), espuma de cloruro alcalino (2.5%, pH 12.4),<br />
nonilfenol etoxilado + H3PO4 (0.8%, pH 2.0)(26).<br />
<br />
Idealmente, un buen desinfectante se debe utilizar en la concentración adecuada teniendo en cuenta<br />
efecto/coste, con una rápida actividad (menos de 2 minutos para al menos un 99% de inactivación.<br />
En Lb. delbrueckii se ha conseguido esta tasa de éxito) en presencia de materiales orgánicos y con<br />
una actividad frente a un amplio rango de fagos de LAB. Aún así, el mecanismo de acción de los<br />
biocidas está poco estudiado(26).<br />
<br />
<b><i>3.3.2 Rotación de cultivos</i></b><br />
La rotación de cultivos es la piedra angular de un sistema de control de fagos eficiente, sobre todo<br />
en la elaboración de quesos, debido a la posible amplificación recurrente en fermentaciones. Es<br />
necesario realizar un seguimiento riguroso de posibles nuevos fagos mediante PCR, así como su<br />
gama de huéspedes por ensayos microbiológicos, y analizar cuidadosamente la sustitución de una<br />
cepa resistente por otra para que las características deseadas se mantengan (porque los fagos pueden<br />
desarrollar mutaciones y así infectar a bacterias que en teoría eran resistentes)(26).<br />
<br />
Para diseñar fermentaciones con cultivos iniciadores diferentes, por ejemplo, se puede utilizar de<br />
forma segura el suero resultante de una fermentación de queso cheddar con cepas iniciadoras<br />
mesófilas, en la fabricación de yogur o queso en un proceso que requiere cultivos termofílicos.<br />
Además, el uso de productos lácteos concentrados de otra planta de productos lácteos (que puede<br />
utilizar cultivos iniciadores diferentes) puede ofrecer una protección adicional. Aunque este último<br />
también muy probablemente aumentará la biodiversidad del fago dentro de la fábrica(50).<br />
<br />
Dependiendo de las frecuencias de los ataques de fagos y el tamaño de las instalaciones, puede ser<br />
aconsejable analizar la leche (u otros ingredientes) para la presencia de fagos antes de comenzar el<br />
proceso de fermentación una vez hemos “rotado“ la cepa resistente, para confirmar que la carga<br />
inicial del fago no representa un riesgo significativo de insuficiencia de fermentación(50).<br />
<br />
<b><i>3.3.3. Medios de cultivo inhibidores</i></b><br />
En cuanto a los medios de cultivo inhibidores de fagos (PIM, por su sigla en inglés), se han<br />
comercializado en su mayoría como anticuerpos (Acs.), DARPins (figura 13), y tampones que<br />
secuestran cationes divalentes (fundamentalmente Ca2+) como los citratos y los fosfatos. Éstos<br />
últimos son también reguladores del pH(23).<br />
<br />
Los Acs. son capaces de neutralizar fagos. Se estudiaron dos tipos de Acs. en Lc. paracasei. Uno<br />
tenía como objetivo la proteína principal de la cápsida, e inactivó al 31% de fagos añadidos al<br />
medio. Otro tenía como objetivo la proteína de unión al receptor, y la inactivó un 86%.<br />
Las proteínas llamadas DARPins son polímeros diseñados con<br />
monómeros de ankarina (designed ankyrin repeat proteins). Éstas<br />
proteínas se unen específicamente a la punta de la proteína de unión al<br />
receptor del fago de Lactococcus sp.<br />
<br />
Finalmente y pese a todo, en los ambientes dinámicos en los que se<br />
encuentra la industria láctea, los fagos acaban desarrollando<br />
mecanismos de defensa. Por eso es necesario estudiar su genética junto a la de su hospedador(26).<br />
<br />
<b>3.4. Aislamiento y caracterización de mutantes resistentes</b><br />
Con un método de cultivos secundarios, se aislaron variantes resistentes a fagos de forma<br />
espontánea de Lb. delbrueckii, raspando en agar MRS colonias aisladas. Su resistencia se comprobó<br />
sembrándolas con fago lítico, y comprobando que crecen normalmente(29).<br />
<br />
Con Lb. helveticus, empleado para la fabricación del queso, se determinó la EOP, la estabilidad de<br />
la resistencia al fago, y los ratios de lisogenia y adsorción, para caracterizar satisfactoriamente<br />
fenotipos de resistencia de los aislados. Pese a la simpleza y rapidez del<br />
método, es un caso aislado de Lactococcus sp. aplicables en el ámbito<br />
comercial, porque los mutantes insensibles a fagos de este género, exhiben<br />
comúnmente cualidades negativas en las fermentaciones lácteas(20).<br />
<br />
Por otra parte, al amplificar por PCR el gen de la subunidad 16S de rRNA<br />
(figura 14), se puede confirmar la identidad de mutantes a nivel de<br />
subespecie. La secuenciación de éste rRNA es una herramienta valiosa para<br />
estudiar comunidades de bacterias en ecosistemas de quesos(17). El<br />
análisis RAPD-PCR se utiliza para determinar la diversidad genética de mutantes, y entre las cepas<br />
parentales(20).<br />
<br />
<b>4. PRODUCCIÓN DE BACTERIOCINAS</b><br />
Un ejemplo de aplicación de vectores de BAL es la producción de bacteriocina, un tipo de péptidos<br />
bactericidas producidos por bacterias Gram-(+) y Gram-(-)(7,8,9) que se usan como agentes<br />
preservantes de alimentos. Junto al ácido láctico, bajan el pH con lo que se protegen los alimentos<br />
de infecciones por microorganismos patógenos(14).<br />
<br />
Para su producción, se determinó con el protocolo de Plackett–Burman, que la lactosa y la<br />
temperatura son los factores más importantes en la producción de bacteriocina: la composición<br />
óptima de lactosa fue de 14.85 g/L, y a una temperatura de 25.59°C aumenta 8 veces la actividad de<br />
bacteriocina en una fermentación de 18 h(4). A continuación se plantea la producción de pediocina<br />
PA-1, y se plantean otras aplicaciones de bacteriocinas.<br />
<br />
<b>4. 1. Diseño de la producción de pediocina PA-1 asociada a la nisina</b><br />
El análisis de la secuencia de nucleótidos (anexo 5) con EMBOSS(34) de un fragmento de 5,6 kB<br />
correspondiente a la seceuencia de pediocina PA-1 (figura 15), indicó la presencia de cuatro marcos<br />
de lectura abiertos (ORF) agrupados (PedA, PedB, PedC y PedD).<br />
<br />
Un análisis de mutación mostró que PedA es el gen funcional de la pediocina PA-1; el PedB no está<br />
involucrado en la producción de pediocina PA-1; el PedC codifica para una proteína relativamente<br />
grande que se requiere para la producción de<br />
pediocina PA-1 en E. coli; y el PedD muestra<br />
fuertes similitudes con varias proteínas de<br />
transporte dependientes de ATP, y con las<br />
necesarias para inducir la competencia para la<br />
transformación genética en S. pneumoniae,<br />
por lo que puede estar implicado en la<br />
translocación de pediocina PA-1(12).<br />
<br />
La producción de pediocina PA-1 acompañada<br />
de nisina, se asocia con la presencia del<br />
plásmido pSRQ11 de 9,4 kb en Pediococcus<br />
acidilactici PAC1.0(12). Sus fragmentos de<br />
restricción se visualizan en la figura 16.<br />
<br />
La enzima de restricción (ER) utilizada es EcoRI (figura 17), y los fragmentos que corta en la<br />
pediocina PA-1 se visualizan en el anexo 6. Se demostró por subclonaje de pSRQ11 en E. coli que<br />
dicho procariota puede producir PA-1 y secretarla.<br />
<br />
Un análisis de supresión mostró que se<br />
requiere un fragmento de 5,6 kB SalI-EcoRI<br />
derivado de pSRQ11 para la producción de<br />
pediocina PA-1(12). En este diseño se utiliza<br />
EcoRI, porque es la única ER que corta en una<br />
secuencia no codificante del gen de la<br />
pediocina PA-I en Pediococcus acidilactici(13).<br />
<br />
El operón de cuatro genes (PedA-D) requerido para la producción de pediocina se puede clonar en<br />
el vector de expresión nisina inducible pMSP3535H3, corriente abajo de los promotores<br />
endógenos(31), y con modificaciones iniciales al promotor de la nisA y la región de control del<br />
número de copias como resultado el vector pMSP3535H2, seguido por la inserción del gen de la<br />
inmunidad a la nisina, nisI, se forma el vector pMSP3535H3(31). El vector resultante tiene expresión<br />
aumentada de pediocina en S. thermophilus, L. lactis subsps. lactis y casei(6), y su construcción se<br />
ilustra en el anexo 7.<br />
<br />
El vector pUC18 se puede adquirir de Life Technologies Inc., y pPC418 se construye de acuerdo a<br />
una estrategia previamente descrita recogida en el anexo 8. La transformación de las células de E.<br />
coli compententes OMNIMAX ™ 2 resistentes químicamente al fago T1, se lleva a cabo por un<br />
método de choque térmico. La transformación de células de S. thermophilus ST128, L. lactis subsp.<br />
lactis y L. lactis subsp. casei ML3 C2 se realiza por electroporesis estándar. Los transformantes se<br />
seleccionan inicialmente según tengan plásmido recombinante por PCR según la tabla 2. Se ha<br />
demostrado que se expresa en BAL como S. thermophilus y Lc. lactis(31).<br />
<br />
<b>4. 2. Otras aplicaciones de bacteriocinas</b><br />
La producción heteróloga de bacteriocinas en otros hospedadores podría constituir una alternativa<br />
válida para evitar patologías relacionadas con la contaminación de microbios patógenos(51). Otros<br />
ejemplos de bacteriocinas transfectables de forma heteróloga son la lactacina A(6), B, y F(4), la<br />
enterocina P(6), la acidocina 8912 y la enterolisina A(52).<br />
<br />
Se han expresado y secretado a través de la lactocina quimeras de pediocina PA-1 fusionada a los<br />
péptidos señal de lactocina A o enterocina P(6).<br />
<br />
Respecto a las lactacina B y F, la acidocina 8912, son<br />
producidas por ciertas cepas de L. acidophilus como.<br />
L. gasseri LA39 (figura 18), que por su parte es<br />
capaz de producir gasericina A, una bacteriocina<br />
inhibitoria del crecimiento de patógenos potenciales<br />
en productos fermentados(4).<br />
<br />
En cuanto a la enterolisina A madura (EnlA), es de<br />
interés al ser una bacteriocina lábil de clase III,<br />
sintetizada por Enterococcus faecalis, como una<br />
proproteína que rompe la PC de bacterias Gram-(+)<br />
incluyendo Lc. lactis(52). Pueden desarrollarse cepas<br />
de Lc. lactis subsp. cremoris NZ9000 y Lc. lactis<br />
subsp. lactis IL1403 que produzcan de forma<br />
heterogénea la EnlA para inducir la lisis controlada, y<br />
la liberación de enzimas intracelulares que pueden<br />
producir ACE-IP, una proteína en LD bovina (BSM) de interés inmunitario que se comentará a<br />
continuación(52).<br />
<br />
El clonaje del gen enlA de la enterolisina A (EnlA) se diseña desde Enterococcus faecalis DAC9,<br />
mediante la expresión de la proteína codificante pMLG2 del vector plasmídico pMSP3545, y bajo<br />
el control del promotor inducible PnisA. Se expresa de forma heteróloga como EnlA maduro en<br />
BAL como Lc. lactis subsp. cremoris NZ9000 y Lc. lactis subsp. lactis IL1403(52).<br />
<br />
Además de la producción de bacteriocinas por microorganismos iniciadores, los componentes<br />
inmuno-moduladores en la leche fermentada pueden tener su origen directamente en los<br />
componentes metabólicos de la misma leche(8).<br />
<br />
<b>5. MEJORA EN LA PRODUCCIÓN DE LACTATO Y AROMAS EN </b><b>FERMENTACIONES</b><br />
<b>5. 1. Producción de diacetilo</b><br />
El diacetilo es un ingrediente aromático en natas, en mantequillas evita que su fermentación sea<br />
costosa debido a su lentitud, y da el olor a mantequilla característico, y puede encontrarse en<br />
carvezas y vinos, a veces considerado contaminante(43), aunque en algunos es característico<br />
(Scottish Ales, muy pocas Lagers como la Pilsner Urquell(44)). Ésto se puede conseguir añadiendo<br />
genes de la citrato permeasa (CP, enzima implicada en translocar el citrato del medio al interior<br />
celular de las BAL de interés), y genes de la acetolactato sintasa (ALS, figura 19, metaboliza el<br />
acetato a diacetilo). Así, podemos aumentar la producción de diacetilo en la mantequilla, haciéndola<br />
más ácida y, con esto, que sea agradable al paladar(14).<br />
<br />
Los genes de la CP y la ALS se pueden integrar en un plásmido dual que contenga un plásmido<br />
críptico de BAL, y otro con el gen de interés procedente de una especie fácil de cultivar y hacer<br />
crecer en el laboratorio, como E. coli. Ejemplos de<br />
plásmidos resultantes son los PWC: pW, pS y pP. Éstos<br />
contienen un promotor fuerte procedentes del fago T7 que<br />
sirve tanto para los genes de la CP como para los de la<br />
ALS (es decir, están en un “cassette“ de expresión)(14).<br />
<br />
Al batir algunas natas fermentadas, se rompen sus<br />
glóbulos grasos, aglomerándose como grasa por fuerzas<br />
de Van der Waals, de forma que obtenemos una nata<br />
incompleta porque sólo queda suero ácido. Este suero es<br />
la mazada de mantequilla, que conserva hasta un 2% de<br />
agua y algunos aromas de fermentación(14).<br />
<br />
Producir diacetilo en altas concentraciones con BAL modificadas genéticamente, permite que al<br />
inyectarlo sobre leche desnatada (LD) dulce, obtengamos una mantequilla de calidad. De hecho en<br />
Suiza se produce mantequilla con un variante de bacterias altamente productora desde hace quince<br />
años(2). Hay algunas BAL para ello, que usan citrato como fuente de carbono, y lo transforman en<br />
diacetilo: Leuconostoc cremoris, Lc. cremoris, Pediococcus sp.(14).<br />
<br />
<b>5. 2. Producción de acetaldehido</b><br />
El acetaldehido es un ingrediente de leches fermentadas, da el frescor a los yogures, y puede<br />
producirse por BAL como Lb. bulgaricus. Podemos modificar convenientemente plásmidos para<br />
transfectarlos en BAL, y así aumentar la generación de diacetilo y acetaldehido, con el consiguiente<br />
incremento en el aroma del producto láctico resultante. Ésto se puede lograr simplemente<br />
introduciendo un promotor activo más fuerte(14).<br />
<br />
<b>6. MODULACIÓN DE LA ACTIVIDAD IMUNITARIA MEDIADA POR PROBIÓTICOS</b><br />
Otra aplicación de interés, fuera del ámbito de la alimentación, es su efecto intensificador de la<br />
actividad inmunitaria en vacunas como la poliomielitis y la influenza(16), y en la mucosa<br />
intestinal(1,2). El uso de cepas de Lactobacillus que actúan como coadyuvantes mejorando la<br />
respuesta a Acs de la vacuna de la poliomielitis(18).<br />
<br />
Respecto a la influenza, infección respiratoria viral aguda con significante mortalidad en adultos de<br />
mediana edad, la inmunidad adaptativa debe ser inducida a priori con una vacuna, pero tiene una<br />
efectividad clínica limitada(17). Para mejorar su respuesta se propuso usar una cepa de Lb.<br />
fermentum CECT5716 cuya seguridad alimenticia está comprobada(16), para estimular al sistema<br />
inmunitario asociado a la mucosa gástrica, que es el mayor compartimento inmunitario del<br />
cuerpo(52). Su consumo indujo un incremento en los niveles de IgA que reducían los casos de<br />
diarrea, y de las células NK, propio de proteínas y oligosacáridos presentes en leche humana desde<br />
la cual procede también esta bacteria. El desarrollo de síntomas propios de enfermedades<br />
relacionadas con la influenza (ILI) en los pacientes que consumieron probióticos fue menor que en<br />
los individuos que se vacunaron sin ellos, demostrando su efecto potenciador(17).<br />
<br />
<b>7. OTRAS APLICACIONES</b><br />
En este apartado se comentará brevemente la implicación de BAL como probióticos para producir<br />
ingredientes como lantibióticos, como vectores para tratar la hipertensión, y finalmente para la<br />
producción de otros ingredientes.<br />
<br />
Una aplicación es proteger quesos mediante lantibióticos (péptidos inhibidores del crecimiento de<br />
hongos y levaduras) que impiden el enmohecimiento de su cubierta, porque es un inhibidor de la<br />
esporulación. Es clave para evitar quese contaminen de Clostridium sp., que les da el olor a podrido<br />
(ácido sulfhidrílico), pasteuriza a baja temperatura (72ºC) y sus esporas resisten al tratamiento<br />
térmico del queso. Lantibióticos como la nisina se encuentran en la cera amarilla de sus cubiertas(14).<br />
En cuanto al tratamiento de la hipertensión, se han desarrollado cepas de Lc. lactis recombinante, en<br />
el cual se libera mediante una lisis controlada, un inhibidor de la enzima convertidora de<br />
angiotensina (el ACE-IP), para el tratamiento de enfermedades cardiovasculares (ECV) o en casos<br />
de alta presión vascular (HTA), y peude ser incluído en el desarrollo de alimentos funcionales con<br />
propiedades antihipertensivas(52).<br />
<br />
Para concluir quisiera también mencionar la producción industrial mediante BAL de productos<br />
panarios, chorizo, salchichas, y en general todos los embutidos cuya forma de presentación los<br />
protege del pH, la fermentación maloláctica en vinos, espesantes para mejorar la untuosidad con<br />
hexopolisacáridos, de goma xantano, raminosa, espesantes, reducción del colesterol, tratamiento de<br />
diarreas(53), e incluso se investigan péptidos para luchar contra enfermedades(14) como la hemofilia<br />
(yogures con lactoferrina bovina, que además dificulta el crecimiento de patógenos como Shigella<br />
sp.)(1) y otros aditivos de interés(14).<br />
<br />
<b>8. FUENTES, AISLAMIENTO, CARACTERIZACIÓN Y EVALUACIÓN DE </b><b>PROBIÓTICOS</b><br />
Se han encontrado probióticos en Kurut (leche fermentada China de un pariente de las ovejas, el<br />
Yak), kéfir, leche Masai, Koumiss (leche fermentada); alimentos fermentados nigerianos; quesos<br />
italianos, búlgaros (eficacia demostrada en campesinos longevos(54)) y argentinos; mucosa colónica<br />
y heces humanas; estómago de cerdos, ratas, aves de corral, abejas, peces de agua dulce y salada,<br />
trucha arcoiris y camarón; carne, frutas, aceitunas verdes de Aloreña, productos en escabeche(3), y<br />
constitutivos de la primera barrera microbiológica frente a la infección por patógenos intestinales y<br />
urogenitales como Lactobacillus sp., de función antialergénica(55).<br />
<br />
Las cepas más frecuentemente usadas (y demostradas) como probióticos son pues aisladas<br />
principalmente de productos fermentados tradicionales, estómagos, heces, y leche materna. La<br />
desnaturalización en grandiente en gel de electroforesis, gradiente de temperatura en el mismo, e<br />
hibridación fluorescente in situ, son ejemplos de métodos moleculares para identificar y caracterizar<br />
probióticos. Examinar el genoma entero, acelera el descubrimiento de nuevas funciones<br />
probióticas(3).<br />
<br />
Es necesario desarrollar métodos para relacionar la divesidad estructural y el funcionamiento del<br />
complejo ecosistema de los productos lácteos con probióticos.<br />
<br />
Han resultado especialmente destacados la caracterización de probióticos mediante detección del<br />
rRNA 16s, la capacidad actual de clonar largos fragmentos, para crear librerías metagenómicas que<br />
facilitan la modificación de nuevas BAL útiles en la alimentación, y los avances relevantes en<br />
cuanto al conocimiento de la interacción con sus consumidores, los huéspedes de las BAL.<br />
<br />
La aproximación combinando el perfil genético de los ribosomas 16s puede relacionar la estructura<br />
con la función en el ecosistema. Destaca también la aplicación de microchips de oligonucleótidos<br />
en ecología microbiana de quesos, que podría beneficiar el desarrollo de futuros probióticos(24).<br />
<br />
La habilidad de clonar largos fragmentos de DNA metaagenómico permite señalizar operones<br />
enteramente funcionales para recuperar hasta rutas metabólicas enteras. Pronto será posible predecir<br />
la formación de sabor de varias BAL, y en segundo lugar encabezar el diseño de escaneos y<br />
selección de cepas(24).<br />
<br />
Generar y analizar librerías metagenómicas es una aproximación poderosa para cultivar y archivar<br />
recursos genéticos ambientales. Puede ser útil identificar los organismos presentes en ecosistemas<br />
de quesos, qué hacen, y cómo su información genética puede ser útil para la humanidad(24).<br />
<br />
Entender los mecanismos de reconocimiento de los probióticos con sus hospedadores permite una<br />
selección adecuada de probióticos y puede permitir el desarrollo de nuevas funciones probióticas(2).<br />
<br />
<b>CONCLUSIONES</b><br />
Debido al elevado valor nutricional de la leche y los productos lácteos, puesto que proporcionan<br />
multitud de nutrientes de alto valor biológico (proteínas, grasa, CH como la lactosa, vitaminas<br />
liposolubles, y minerales como el Ca2+), resulta de gran interés industrial el desarrollo de cepas de<br />
BAL modificadas genéticamente mediante plásmidos u otros vectores, para mejorar la producción<br />
de productos lácteos con beneficios funcionales, entre los que destaca la mejora del sistema<br />
inmunitario del hospedador debido a que muchas tienen una relación de simbiosis con sus<br />
hospedadores naturales.<br />
<br />
Las BAL se pueden modificar genéticamente para prevenir la acción de los patógenos en tanto al<br />
producto lácteo, como al hospedador que consuma el producto de sus fermentaciones. Éstas<br />
modificaciones involucran:<br />
• La resistencia a fagos.<br />
◦ A nivel de su adsorción.<br />
◦ Portando genes que lleven a su muerte si son infectadas (evitan la proliferación del fago).<br />
◦ Digiriendo el material genético del fago.<br />
• La producción de un amplio rango de agentes preservantes de alimentos.<br />
◦ Bacteriocinas.<br />
◦ Lantibióticos.<br />
<br />
Finalmente, las BAL consideradas como GRAS, cuando son transformadas genéticamente, pueden<br />
mejorar sus características como probióticos, por lo que suman alguno de sus efectos beneficiosos<br />
al subproducto en el que estén asociadas:<br />
• Mejoran la producción de lactato, aromas y propiedades biofísicas deseables en<br />
fermentaciones de utilidad en la industria láctea asociados a la presencia de diacetilo y<br />
acetaldehido.<br />
• Pueden tener aplicación clínica en enfermedades como la hipertensión arterial, o la mejora<br />
en la respuesta a la vacuna de la influenza.<br />
<br />
<b>CONCLUSIONS</b><br />
Milk and its lactic products provide a wide range of high biological value nutrients. These include<br />
proteins, fat, carbohydrates such as lactose, lipid soluble vitamins, or minerals like calcium.<br />
Because of that, the development of genetic engineering LAB strains via plasmids or other vectors<br />
is interesting in the dairy industry as they enhance in the beneficial dairy products. This is because<br />
they enhance the host inmune system due to their symbiotic relationship with the host.<br />
The LAB can be genetically modified in order to prevent pathogenic proiferation, both in the dairy<br />
product and their host. These modifications involve:<br />
• Phage resistance<br />
◦ Related to theur adsortion<br />
◦ Via cell death when infected<br />
◦ Via phage DNA digest<br />
• The production of a wide range of food preserver agents<br />
◦ Bacteriocins<br />
◦ Lantibiotics<br />
<br />
To conclude, when the GRAS LAB are genetically transformed, they can enhance their probiotic<br />
characteristics, so they add some beneficts to the associated dairy product:<br />
• They enhance lactic acid production, their aroma, and desired biophysics properties in useful<br />
dairy industry fermentations, which are associated to diacetyl and diacetaldehyde.<br />
• They can be included in clinical treatments such as hypertension or the influenza<br />
vaccination.<br />
<br />
<b>REFERENCIAS</b><br />
1. Saito T. Selection of useful probiotic lactic acid bacteria from the Lactobacillus acidophilus<br />
group and their applications to functional foods. Anim Sci J. 2004;75:1-13.<br />
2. Bermudez-Brito M, Plaza-Díaz J, Muñoz-Quezada S, Gómez-Llorente C, Gil A. Probiotic<br />
Mechanisms of Action. Ann Nutr Metab. 2012;61:160-174.<br />
3. Fontana L, Bermudez-Brito M, Plaza-Diaz J, Munoz-Quezada S, Gil A. Sources, isolation,<br />
characterisation and evaluation of probiotics. Br J Nutr. 2013;109:S35–50.<br />
4. Hwanhlema N, Chobertb JM, H-Kittikuna A. Bacteriocin-producing lactic acid bacteria isolated<br />
from mangrove forests in southern Thailand as potential bio-control agents in food: Isolation,<br />
screening and optimization. Food Control. 2014 Jul;41:202-11. |<br />
dx.doi.org/10.1016/j.ijfoodcont.2014.01.021<br />
5. Gútiez L, Borrero J, Jimenez JJ, Gomez-Sala B, Recio I, Cintas LM, Herranz C, Hernandez PE.<br />
Controlled enterolysin A-mediated lysis and production of angiotensin converting<br />
enzymeinhibitory bovine skim milk hydrolysates by recombinant Lactococcus lactis. Int Dairy J.<br />
2014 Jan;34:100-3.<br />
6. Primrose SB, Twyman RM. Principles of Gene Manipulation and Genomics. Blackwell. 2006;7.<br />
7. Klaenhammer T. Genetics of bacteriocin produced by lactic acid bacteria. FEMS Microbiol Rev.<br />
1993;12:39-86.<br />
8. Jack R, Tagg J, Ray B. Bacteriocins of Gram positive bacteria. Microbiol Rev. 1995;59:171-200.<br />
9. Nes I, Diep D, havarstein L, Brurberg M, Eijsink V, Holo H. Biosynthesis of bacteriocins in lactic<br />
acid bacteria. Antonie van eeuwenhoek. 1996;70:113-26.<br />
10. Coderre PE, Somkuti GA. Cloning and Expression of the Pediocin Operon in Streptococcus<br />
thermophilus and Other Lactic Fermentation Bacteria. Curr Microbiol. 1999;39:295-301.<br />
11. Riley M, Wertz J. Bacteriocins: Evolution, Ecology, and Application. Annu Rev Microbiol.<br />
2002;56:117-37.<br />
12. Marugg JD, Gonzalez CF, Kunka BS, Ledeboer AM, Pucci MJ, Toonen MY, Walker SA,<br />
Zoetmulder LCM, Vandenbergh PA. Cloning, expression, and nucleotide sequence of genes<br />
involved in production of pediocin PA-1, a bacteriocin from Pediococcus acidilactici PAC1.0.<br />
Appl Environ Microbiol. 1992;58(8):2360-7.<br />
13. Karakas A, Narbad A, Horn N, Dodd H, Parr A, Colquhoun I, Gasson M. Post-translational<br />
modification of nisin. Eur J Biochem. 1999;261:525.<br />
14. Gil A. Comentario personal.<br />
15. Fonseca F, Marin M, Morris GJ. Stabilization of Frozen Lactobacillus delbrueckii subsp.<br />
bulgaricus in Glycerol Suspensions: Freezing Kinetics and Storage Temperature Effects. Appl<br />
Environ Microbiol. 2006 Oct; 72(10): 6477.<br />
16. Gil-Campos M, Lopez MA, Rodriguez-Benitez MV, Romero J, Roncero I, Linared MD et al.<br />
Lactobacillus fermentum CECT 5716 is safe and well tolerated in infants of 1-6 months of age: A<br />
Randomized Controlled Trial. Pharmacol Res. 2012;65:231-8.<br />
17. Olivares M, Diaz-Ropero MP, MBS, Sierra S, lara-Villoslada F, Fonolla J, Navas M, Rodriguez<br />
JM, Xaus J. Oral intake of Lactobacillus fermentum CECT5716 enhances the effects of influenza<br />
vaccination. Nutrition. 2007;23:254-60.<br />
18. de Vrese M, Rautengerg P, Laue C, Koopmans M, Herremans T, Schrezenmeir J. Probiotic<br />
bacteria stimulate virus specific neutralizing antibodies following a booster polio vaccination.<br />
Eur J Nutr. 2005;44:406-13.<br />
19. Garneau JE, Moineau S. Bacteriophages of lactic acid bacteria and their impact on milk<br />
fermentations. Microbial Cell Factories. 2011;10(1):S20.<br />
20. Rodriguez A, Madera C, Suarez JE. Los virus de las bacterias lacticas: influencia sobre la<br />
fabricacion de alimentos fermentados (no hay enemigo pequeño). CSIC Asturias. 2011 Nov;15:4.<br />
21. Ainsworth S, Zomer A, Mahony J, van Sinderen D. Lytic Infection of Lactococcus lactis by<br />
Bacteriophages Tuc2009 and c2 Triggers Alternative Transcriptional Host Responses. Appl<br />
Environ Microbiol. 2013 Aug;79(16):4789.<br />
22. Chopin M-C, Chopin A, Bidnenko E. Phage abortive infection in lactococci: variations on a<br />
theme. Curr Opin Microbiol. 2005 Aug;8(4):473-9.<br />
23. Lujan MC. Bacteriofagos de Lactobacillus casei/paracasei. Caracterizacion y estudio de la<br />
fagorresistencia. Tesis Doctioral UNL. 2007:71-2.<br />
24.. Randazzo C L, Caggia C, Neviani E, Application of molecular approaches to study lactic acid<br />
bacteria in artisanal cheeses. J Microbiol Methods. 2009;78:1-9.<br />
25. de Lima CP, Bruno LM, de Figueiredo EAT, del Lujan A, Carvalho JDG, de Carvalho AKF.<br />
Phage resistance of acid lactic bacteria isolated from Coalho cheese industries. Cienc Rural.<br />
2012 Jun;42(6):1117-22.<br />
26. Allison GE, Klaenhammer TR. Phage resistance mechanisms in lactic acid bacteria. Int Dairy J.<br />
1998 Mar;8(3):207-26.<br />
27. Binetti AG, Suarez VB, Tailliez P, Reinheimer JA. Characterization of spontaneous phage<br />
resistant variants of Streptococcus thermophilus by randomly amplified polymorphic DNA<br />
analysis and identification of phage-resistance mechanisms. Int Dairy J. 2007;17:1115-22.<br />
28. Labrie SJ, Samson JE, Moineau S. Bacteriophage resistance mechanisms. Nat Rev Microbiol.<br />
2010 May;8:317-27.<br />
29. Reinheimer JA, Morelli R, Callegari ML, Bottazzi V. Phage resistance in Lactobacillus<br />
helveticus CNRZ 328. Microbiol Aliments Nutr. 1993;11:235-40.<br />
30. Youle M, Schaechter M. Six questions about CRISPRs. ASMscience. 2011 Apr.<br />
31. Renye JA, Somkuti GA, Garabal JI, Du L. Heterologous production of pediocin for the control<br />
of Listeria monocytogenes in dairy foods. Food Control. 2011 Dec;22(12):1887–92.<br />
32. Secuencia de la pediocina PA-1 (PedA): M83924.1. | ebi.ac.uk/ena/data/view/M83924<br />
33. EcoR1. | thermoscientificbio.com/restriction-enzymes/ecori/<br />
34. Emboss. | emboss.bioinformatics.nl/<br />
35. Raz Y, Tannenbaum E. The Influence of Horizontal Gene Transfer on the Mean Fitness of<br />
Unicellular Populations in Static Environments. Genetics. 2010 May;185(1):328.<br />
36. Rul F, Ben-Yahia L, Chegdani F, Wrzosek L, Thomas S, Noordine M-L, Gitton C, Cherbuy C,<br />
Langella P, Thomas M. Impact of the Metabolic Activity of Streptococcus thermophilus on the<br />
Colon Epithelium of Gnotobiotic Rats. J Biol Chem. 2011 Mar; 286(12): 10292.<br />
37. Barrangou R, Philippe Horvath P. Lactic Acid Bacteria Defenses Against Phages. Food<br />
Microbiol and Food Saf. 2011:459-478.<br />
38. Kolatka K, Kubik S, Rajewska M, Konieczny I. Replication and partitioning of the broadhostrange<br />
plasmid RK2. Plasmid. 2010 Nov;64(3):120.<br />
39. Birkeland M-K, Holo H. Transduction of a Plasmid Carrying the Cohesive End Region from<br />
Lactococcus lactis Bacteriophage LC3. Appl Environ Microbiol. 1993 Jun;59(6):1967.<br />
40. Chapot-Chartier M-P, Vinogradov E, Sadovskaya I, Andre G, Mistou M-Y, Trieu-Cuot P, Furlan<br />
S, Bidnenko E, Courtin P, Pechoux C, Hols P Dufrene YF, Kulakauskas S. Cell Surface of<br />
Lactococcus lactis is Covered by a Protective Polysaccharide Pellicle. Biol Chem. 2010 Apr;<br />
285(14): 10467.<br />
41. Mosavi LK, Minor DL, Peng ZY. Consensus-derived structural determinants of the ankyrin<br />
repeat motif. Proc Natl Acad Sci USA. 2002;99:16029-34.<br />
42. Holmes KL, Culver GM. Analysis of Conformational Changes in 16 S rRNA During the Course<br />
of 30 S Subunit Assembly. J Mol Biol. 2005 Nov;354(2):347.<br />
43. Sakamoto K, Konings WN. Beer spoilage bacteria and hop resistance. Int J Food Microbiol.<br />
2003 Dec 31;89(2-3):105-24.<br />
44. Aparicio R. Diacetilo: su produccion y reduccion. Revista Mash. 2010 Apr 19. |<br />
revistamash.com/detalle.php?id=367<br />
45. Bergey DH. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. 1923;1.<br />
46. Vinderola G, Briggiler M, Guglielmotti DM, Perdigon G, Giraffa G, Reinheimer J, Quiberoni A.<br />
Phage-resistant mutants of Lactobacillus delbrueckii may have functional properties that differ<br />
from those of parent strains. Int J Food Microbiol. 2007;116:96-102.<br />
47. Landete JM, Peiroten A, Rodriguez E, Margolles A, Medina M, Arques JL. Anaerobic green<br />
fluorescent protein as a marker of Bifidobacterium strains. Int J Food Microbiol. 2014<br />
Apr;175:6-13. | dx.doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2014.01.008<br />
48. Oddone GM, Mills DA, Block DE. Incorporation of nisI-mediated nisin immunity improves<br />
vector-based nisin-controlled gene expression in lactic acid bacteria. Plasmid. 2009;61:151-8.<br />
49. Solioz M, Bienz D. Bacterial genetics by electric shock. TIBS. 1990;15:177.<br />
50. Apuntes bioquimica experimental II.<br />
51. Gutierrez J. Caracterizacion inmunoquimica de la enterocina P y evaluacion de su clonacion,<br />
produccion y expresion funcional en Escherichia coli, Methylobacterium extorquens,<br />
Lactococcus lactis y Pichia pastoris. Madrid: Memoria para optar al grado de doctor en<br />
veterinaria. 2005;1:11-62. | biblioteca.ucm.es\tesis\vet\ucm-t28407.pdf<br />
52. Ogra PL, Mestecky J, Lamm ME, Strober W, Brenenstock J, McGhee JR. Mucosal inmunology.<br />
London: Academic Press;1999.<br />
53. Tomo II: Composición y Calidad Nutritiva de los Alimentos. Gil A. Tratado de Nutrición. Tomo<br />
II: Composición y Calidad Nutritiva de los Alimentos. Madrid: Panamericana. 2010;2.<br />
54. Hume ME. Historic perspective: prebiotics, probiotics, and other alternatives to antibiotics.<br />
Poult Sci. 2011;90:2663–9.<br />
55. Martin R, Olivares M, Marin ML, Fernandez L, Xaus J, Rodriguez JM. Probiotic Potential of 3<br />
Lactobacilli Strains Isolated From Breast Milk. J Hum Lact. 2005;21(1):8-17.<br />
<br />
<a href="http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/" rel="license"><img alt="Licencia de Creative Commons" src="https://i.creativecommons.org/l/by-nc/4.0/88x31.png" style="border-width: 0;" /></a><br />
Este obra está bajo una <a href="http://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/" rel="license">licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial 4.0 Internacional</a>.
<br />
<br />Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com1tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-22418344969477890092015-01-19T11:12:00.000+01:002015-01-19T11:12:33.335+01:00Formato de separador decimal en Open Office<a href="http://4.bp.blogspot.com/-AqGm90YJRgE/TcwjWivb1UI/AAAAAAAAAM8/FBVReKqCDMg/s1600/openoffice_tableur_3D.png" onblur="try {parent.deselectBloggerImageGracefully();} catch(e) {}"><img alt="" border="0" src="http://4.bp.blogspot.com/-AqGm90YJRgE/TcwjWivb1UI/AAAAAAAAAM8/FBVReKqCDMg/s400/openoffice_tableur_3D.png" id="BLOGGER_PHOTO_ID_5605894506359280962" style="cursor: hand; cursor: pointer; display: block; height: 256px; margin: 0px auto 10px; text-align: center; width: 256px;" /></a><br />
Ejemplo: tenemos los valores<br />
0.12, 0.49<br />
0.24, 0.98<br />
0.36, 1.47<br />
0.48, 1.96<br />
0.6, 2.45<br />
0.72, 2.94<br />
<br />
1º Copiamos<br />
2º Pegamos en una hoja de Open Office Calc. Nos sale una ventana titulada "Importar texto"<br />
3º En "Separador", en mi caso, he de marcar "Coma" para que vaya cada valor a una columna<br />
4º Click en Aceptar.<br />
5º Seleccionamos todos nuestros datos, click derecho de ratón, y click en "Formatear celdas..."<br />
Nos sale una ventana titulada "Formato de celdas"<br />
6º En la pestaña "Números", que debe aparecer por defecto, comprobar:<br />
Categoría: Número<br />
Formato: -1234.12<br />
Lenguaje: Inglés (Estados Unidos) (permite que los decimales se reconozcan como puntos)<br />
7º Click en Aceptar<br />
<br />
Otra opción es cambiar entre punto o coma decimal para todo el sistema:<br />
Panel de control → Reloj, idioma y región → Cambiar formato de fecha, hora o número → Formatos (pestaña predeterminada) → Configuración adicional → Símbolo decimal , o . → Aplicar → Aceptar → Aceptar.<br />
<br />
Si pese a todo no funciona, os dejo una plantilla para que sobreescribáis los datos<br />
https://docs.google.com/leaf?id=0Bxg7j4gfFJ3nMmVhY2NiNzEtMWMyNi00NWQ3LWEzMWItYTUzNmIxM2ZhNjA5&hl=en<br />
<div>
<br /></div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-53309369580844411492015-01-12T15:00:00.002+01:002015-01-12T15:05:33.645+01:00Import subfolders Picasa 3<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="http://1.bp.blogspot.com/-LfXyKzdU25s/VLPSzL5ck3I/AAAAAAAABBw/XZV8hhJKBI4/s1600/floppy-disk-27223_1280.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" src="http://1.bp.blogspot.com/-LfXyKzdU25s/VLPSzL5ck3I/AAAAAAAABBw/XZV8hhJKBI4/s1600/floppy-disk-27223_1280.png" height="317" width="320" /></a></div>
<br />
<blockquote class="tr_bq">
<div style="text-align: center;">
<span style="color: #f3f3f3;">1.- File → Add folder to Picasa... </span></div>
<div style="text-align: center;">
<span style="color: #f3f3f3;">2.- Select the folder in which you want to add subfolder. </span></div>
<div style="text-align: center;">
<span style="color: #f3f3f3;">3.- Select the option Explore always with the Blue turning arr </span></div>
<div style="text-align: center;">
<span style="color: #f3f3f3;">4.- Accept. </span></div>
</blockquote>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-79808888599175795742015-01-11T17:42:00.000+01:002015-01-11T17:42:18.393+01:00Para una chica dolida<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="http://1.bp.blogspot.com/-OfYCwcnpbzo/VLKmtzU0S8I/AAAAAAAABBQ/ZJTV8L1KZ2Y/s1600/Parque-Garcia-Lorca-3.jpg" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" src="http://1.bp.blogspot.com/-OfYCwcnpbzo/VLKmtzU0S8I/AAAAAAAABBQ/ZJTV8L1KZ2Y/s1600/Parque-Garcia-Lorca-3.jpg" height="240" width="320" /></a></div>
<div>
<span style="color: #222222; font-family: arial, sans-serif; font-size: x-small;"><br /></span></div>
<div style="text-align: center;">
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">Para una chica dolida,</span><br />
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">cuya tristeza hace pupa</span><br />
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">y a quien quiero en mi vida.</span></div>
<div style="text-align: center;">
<span style="color: #f3f3f3;"><span style="font-family: arial, sans-serif;"><br /></span><span style="font-family: arial, sans-serif;">Para una </span><span style="font-family: arial, sans-serif;">chica </span><span style="font-family: arial, sans-serif;">dispersa,</span></span><br />
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">que miro de reojillo</span><br />
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">a través de su mesa.</span><br />
<span style="color: #f3f3f3;"><span style="font-family: arial, sans-serif;"><br /></span><span style="font-family: arial, sans-serif;">Para una </span><span style="font-family: arial, sans-serif;">chica </span><span style="font-family: arial, sans-serif;">ocupada,</span></span><br />
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">que siempre está trabajando,</span><br />
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">y termina reventada.</span><br />
<span style="color: #f3f3f3;"><span style="font-family: arial, sans-serif;"><br /></span><span style="font-family: arial, sans-serif;">Para una </span><span style="font-family: arial, sans-serif;">chica </span><span style="font-family: arial, sans-serif;">bonita,</span></span><br />
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">que me hace sentir en cada abrazo</span><br />
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">que mi corazón palpita.</span><br />
<span style="color: #f3f3f3;"><span style="font-family: arial, sans-serif;"><br /></span><span style="font-family: arial, sans-serif;">Para una </span><span style="font-family: arial, sans-serif;">chica </span><span style="font-family: arial, sans-serif;">radiante,</span></span><br />
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">que resplandece en el parque</span><br />
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">aún con el Sol delante.</span><br />
<span style="color: #f3f3f3;"><span style="font-family: arial, sans-serif;"><br /></span><span style="font-family: arial, sans-serif;">Para una </span><span style="font-family: arial, sans-serif;">chica </span><span style="font-family: arial, sans-serif;">que quiero,</span></span><br />
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">que por más que me esmero,</span><br />
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">no doy mi amor entero.</span><br />
<span style="color: #f3f3f3;"><span style="font-family: arial, sans-serif;"><br /></span><span style="font-family: arial, sans-serif;">Para una </span><span style="font-family: arial, sans-serif;">chica </span><span style="font-family: arial, sans-serif;">querida,</span></span><br />
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">que aún sintiéndose herida,</span><br />
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">me acoje en su guarida.</span><br />
<span style="color: #f3f3f3;"><span style="font-family: arial, sans-serif;"><br /></span><span style="font-family: arial, sans-serif;">Para mi amor,</span></span><br />
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">que con pasión o dulzor,</span><br />
<span style="color: #f3f3f3; font-family: arial, sans-serif;">le da a mi vida color.</span></div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-51694907622226847222014-07-14T10:10:00.000+02:002014-07-14T10:10:15.261+02:00Papeles<div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="http://1.bp.blogspot.com/-_hU3URccvZ4/U8OQPMox-HI/AAAAAAAAA-M/EYZaokWM9Rs/s1600/cartas-de-amor-.jpg" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" src="http://1.bp.blogspot.com/-_hU3URccvZ4/U8OQPMox-HI/AAAAAAAAA-M/EYZaokWM9Rs/s1600/cartas-de-amor-.jpg" height="240" width="320" /></a></div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<div style="text-align: center;">
Papeles.</div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
Blancos como mi ilusión antes de conocerte, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
donde ávidos escritores narran sus historias, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
donde aparecen nuestros 4 años de esfuerzo, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
y escribo que llevamos 7 meses por si falla mi memoria. </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
Papeles que sirven como metáforas </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
de oficios, de funciones, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
o de cuadernos de bitácoras, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
y que recogen planes que con ilusión complimos. </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
Mi papel en la vida se hace papiroflexia, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
se dobla, suavemente, hacia un objetivo firme. </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
Mi papel, al conocerte, tiene escrito un cometido, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
y es que surja una sonrisa cuando Buby está conmigo. </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
Es que todo lo que haga no se quede en un cumplido, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
y que todas las misiones sean obra de cupido. </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
Y ahora, mi papel metafórico se ve en un dispositivo, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
donde quiero recordarte que hoy soñé contigo, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
que despierto ilusionado porque llegaste a tu destino, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
pero el bus de esa historia fue un sueño, no me animo. </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
Enciendo rápido el PC para enviarte el texto, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
nerviosismo que no me dejaría escribir recto, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
y me doy cuenta que mi papel no ha quedado claro, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
y continúo mi verso y lo escribo con descaro. </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
Mi papel a veces se escribe y se queda sin tinta, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
fruto, ora de mi despiste, ora de ser una nueva etapa, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
y es que no es la misma tinta la que de noche te tapa, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
de la que en Navidad llenaba y quemaba con su tinta. </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
Ahora la tinta está en otros mares, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
donde te echa de menos mucho, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
Como el águila al aguilucho, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
como la trucha al trucho. </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
<<Porque si la mar fuera de tinta </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
y el cielo fuera papel </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
no se podría escribir </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
lo mucho que es mi querer.>> </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
Porque miro el mar y pienso, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
en agosto me atrapará si estoy quieto, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
y la tinta, que por entonces anhelo, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
describirá mi metáfora del deshielo, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
Donde resurgirás de un verano fugaz, vívido pero helado. </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
Donde mi velero tiñe una lona con J&B, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
y no precisamente de alcohol, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
sino de mi nombre y el de mi amor. </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
Porque una fantasía vuelve, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
y da un giro de 40º, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
temperatura en la que sueño, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
que alquilan un velero dos amados. </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
Para recorrer Parques Naturales, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
y desear que el tiempo se pare, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
mirando en proa olas letales </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
de esperanza, de aliento y vida, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
Solo tú haces eficaces todas las frases que diga, </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
tu papel en mi vida realiza cualquier sueño que persiga </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
y por eso mira en mi fatiga el velero al horizonte </div>
</div>
<div>
<div style="text-align: center;">
donde el mes que viene, viajaré para que tu sonrisa siga. </div>
</div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com1tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-24695419014082593882014-04-26T11:34:00.000+02:002014-04-26T11:34:05.307+02:00Delete Macros from an Open Office Calc file<br />
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="http://3.bp.blogspot.com/-M2_kT7_0g6c/U1t9cHPOryI/AAAAAAAAA8Y/h9Eo5RjT0iM/s1600/Untitled.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" src="http://3.bp.blogspot.com/-M2_kT7_0g6c/U1t9cHPOryI/AAAAAAAAA8Y/h9Eo5RjT0iM/s1600/Untitled.png" height="378" width="640" /></a></div>
<div>
<u><br /></u></div>
<ol>
<li><u>Make a backup</u> of your<i> Filename.ods</i> in orden to check that you won't lost data due to the Macros: <i>Filename (2).ods</i></li>
<li>In <i>Filename (2).ods</i>, <b>Tools </b>→ <b>Macros </b>→ <b>Manage dialogs</b>: it opens Basic OpenOffice Macros organizer window.</li>
<li>Delete all <b>Modules </b>in your <i>Filename (2).ods</i> file, selecting them and clicking the <b>Delete </b>button.</li>
<li>Delete all <b>Dialogs </b>in your <i>Filename (2).ods</i> file, selecting them and clicking the <b>Delete </b>button.</li>
<li>Delete all <b>Libraries </b>having in Location your <i>Filename (2).ods</i> file, selecting them and clicking the <b>Delete </b>button.</li>
<li>Check that you deleted all these three Macros sources properly, and Close with the upper <b>X / red</b> window button.</li>
<li>Save <i>Filename (2).ods</i></li>
<li>Check that you didn't lose data in <i>Filename (2).ods</i></li>
<li>Delete your initial document (<i>Filename.ods</i>) and rename <i>Filename (2).ods </i>to <i>Filename.ods.</i></li>
</ol>
<br />
<br />Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-35600979909021551102014-03-14T21:00:00.000+01:002014-03-14T21:00:01.886+01:00El motivo por el cual mi oreja derecha no está fría<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="http://4.bp.blogspot.com/--Cyj_88PXVI/UyLDGcBWB3I/AAAAAAAAA7Y/x7rCLYtkqFk/s1600/Oreja+roja,+ardiendo,+rosa.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" src="http://4.bp.blogspot.com/--Cyj_88PXVI/UyLDGcBWB3I/AAAAAAAAA7Y/x7rCLYtkqFk/s1600/Oreja+roja,+ardiendo,+rosa.png" height="320" width="264" /></a></div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<div style="text-align: center;">
Mi cosita preciosa, hace mucho que no escribo nada.<br />
Esto es para decir que eres la llama que no se apaga.<br />
Eres la motivación al terminar el día...<br />
El motivo por el cual mi oreja derecha no está fría.</div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<div style="text-align: center;">
Esa sensación de plenitud que antes me faltaba,</div>
<div style="text-align: center;">
esa felicidad que sólo da quien te ama...</div>
<div style="text-align: center;">
Trabajar contigo, banal responsabilidad, </div>
<div style="text-align: center;">
es precioso si luego tengo tu intimidad.</div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<div style="text-align: center;">
Vivimos aventuras, que hacen temblar y curan,</div>
<div style="text-align: center;">
tanta ternura muda cuando sonríes desnuda.</div>
<div style="text-align: center;">
Y es que me acojes en casa si me ves extenuado,</div>
<div style="text-align: center;">
para compartir dulzor que nadie antes me ha dado.</div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<div style="text-align: center;">
Escalofríos orgásmicos,</div>
<div style="text-align: center;">
cenitas con temas románticos,</div>
<div style="text-align: center;">
estudio,</div>
<div style="text-align: center;">
a tu lado, yo no lo repudio.</div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<div style="text-align: center;">
Porque siento en tí volcar</div>
<div style="text-align: center;">
mis profundos sentimientos;</div>
<div style="text-align: center;">
anonadado los veo volar</div>
<div style="text-align: center;">
con amor en sus cimientos.</div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<div style="text-align: center;">
Porque al mirarte elimino</div>
<div style="text-align: center;">
todo mal en el camino</div>
<div style="text-align: center;">
y todo queda resumido</div>
<div style="text-align: center;">
en un cálido suspiro.</div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<div style="text-align: center;">
Cien motivos de inspiración,</div>
<div style="text-align: center;">
evocando una canción,</div>
<div style="text-align: center;">
que aunque sólo tenga guía,</div>
<div style="text-align: center;">
describe tu compañía.</div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<div style="text-align: center;">
Describe que cuando me abrazas,</div>
<div style="text-align: center;">
y saltas tú si no me alcanzas,</div>
<div style="text-align: center;">
siento tu tacto y tu olor, </div>
<div style="text-align: center;">
que me inspiran puro amor.</div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<div style="text-align: center;">
Me alegras, me evades, me resucitas siempre,</div>
<div style="text-align: center;">
que suba las notas Elvira si mi corazón miente.</div>
<div style="text-align: center;">
¿Cómo pude persistir cuando no te conocía,</div>
<div style="text-align: center;">
soñando despierto con quien aún no era mía?</div>
Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0tag:blogger.com,1999:blog-2869129704036433917.post-86335397688494507432014-02-18T20:12:00.000+01:002014-02-18T23:52:25.395+01:00M file to get a column string of rows from MatLab/Octave to Excel/OpenOfficeCalc<div style="text-align: center;">
M file to get a column string of rows from MatLab/Octave to Excel/OpenOfficeCalc.</div>
<div class="separator" style="clear: both; text-align: center;">
<a href="http://1.bp.blogspot.com/-IB0mc39WGd0/UwOwboSrE4I/AAAAAAAAA64/CjqbQ2679P8/s1600/Untitled.png" imageanchor="1" style="margin-left: 1em; margin-right: 1em;"><img border="0" src="http://1.bp.blogspot.com/-IB0mc39WGd0/UwOwboSrE4I/AAAAAAAAA64/CjqbQ2679P8/s1600/Untitled.png" height="640" width="484" /></a></div>
<div style="text-align: center;">
<br /></div>
<div style="text-align: center;">
This program asks you the grade of rows you need, and its number, and it brings a column of the rows you need to operate. Works pretty well when working with nets in which you need to add data from columns + rows at the same time. You copy a row to a column, and you can procceed. Spanish display. Working on both translations.</div>
<br />
function [FaC] = CFsw<br />
%CFsw cambia filas por columnas en una cadena para excel<br />
%cambiar columnas por filas en otra línea<br />
% ascii = char(reshape(11:130, 10, 12)');<br />
clc; FaC = []; cond = 0;<br />
<br />
disp('Introduzca como cadena, el/los número(s)...')<br />
F_FaC = input('de la fila a trasponer: ');<br />
<br />
disp('Introduzca como cadena, la letra...')<br />
C_i = input('de la columna inicial: ');<br />
if length(C_i) > 1<br />
error('Nombre de columna inicial demasiado largo')<br />
end<br />
<br />
disp('Introduzca como cadena, la(s) letra(s)...')<br />
C_f = input('de la columna final: ');<br />
if length(C_f) == 2<br />
n_C_f = (single(C_f(1))-64)*26 + single(C_f(2));<br />
C = single(C_i);<br />
<br />
while C < n_C_f<br />
if cond == 0<br />
for C = single(C_i):90; FaC(C-C_i+1,:) = [' ','=',C,F_FaC]; end %#ok<AGROW><br />
cond = 1;<br />
end<br />
<br />
if cond == 1<br />
for k = 65:single(C_f(1))<br />
for l = 65:90<br />
C = C+1; FaC(C-C_i+1,:) = ['=',k,l,F_FaC]; %#ok<AGROW><br />
%usar rem(C,90) como resto div?<br />
if C >= n_C_f; break; end<br />
end<br />
end<br />
end<br />
end<br />
<br />
FaC = char(FaC);<br />
<br />
elseif length(C_f) == 1<br />
for C = single(C_i):single(C_f)<br />
FaC(C-C_i+1,:) = ['=',C,F_FaC]; %#ok<AGROW> %Columnas a Filas<br />
end<br />
FaC = char(FaC);<br />
<br />
else<br />
error('Nombre de columna demasiado largo')<br />
end<br />
<br />
end<br />
<br />
<br />Anonymoushttp://www.blogger.com/profile/08103035194854622382noreply@blogger.com0